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头孢拉定胶囊的含量测定方案 一、前言 头孢拉定胶囊为β-内酰胺类抗生素、头孢菌素类药。用于敏感菌所致的急性咽炎、扁桃体炎、中耳炎、支气管炎和肺炎等呼吸道感染、泌尿生殖道感染及皮肤软组织感染等。本品主要成分为头孢拉定，头孢拉定的含量是决定头孢拉定胶囊是否合格的重要因素。药品的含量是指一种药品制剂中包含的国家标准规定的有效成分的数量，药品的含量或效价是评定药品的主要指标之一。因此，设计其测定方法时，应根据药品特性、剂型、处方、鉴别试验和纯度检查综合考虑，当鉴别试验和纯度检查保证了专属性和纯度的情况下，含量测定方法的选择要着眼准确性、稳定性和可重复性。 头孢拉定为第一代半合成头孢菌素，化学名称为(6R，7R)-7[(R)-2-氨基-2-(1，4-环已烯基)乙酰氨基]-3-甲基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸。根据《中国药典》2020年版第二部记载，实验中为了检测头孢拉定胶囊中头孢拉定的含量，建立了高效液相色谱法。 二、设计依据 根据《中国药典》2020年版第二部记载，检测头孢拉定胶囊中头孢拉定的含量用的是高效液相色谱法。该法对头孢拉定及其主要杂质的保留时间会因为流动相中有机相的选择和配比产生较大影响。通过查阅相关文献资料，选择合适的有机相并适当提高所占比例，分离度和柱效符合药典要求，样品的分析时间可大大缩短，含量测定结果无明显差异。本设计方案依据现行版《中国药典》，采用高效液相色谱法对头孢拉定胶囊进行含量测定。 高效液相色谱法以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。测定头孢拉定胶囊中头孢拉定的方法也有紫外分光光度法，但比起紫外分光光度法，明显高效液相色谱法的精确度更高。 三、设计方案 （一）仪器与试药 1.仪器 AGILENT 1100 SERISE型高效液相色谱仪 (安捷伦) ; 分析天平XS105DU (0.1mg;0.01mg)； 微量进样器; 超声波清洗器(KQ-200KDE); 一次性注射器; 0.45μm微孔滤膜; 2.试药 头孢拉定对照品 (中国药品生物制品检定所) ; 头孢拉定胶囊作为供试品 (上海现代制药股份有限公司）; 甲醇为色谱纯;水为重蒸馏水;其余试剂均为分析纯。 （二）色谱条件 色谱柱 (Agilent C18 5u 100A 250mm×4.6mm) ; 水-甲醇-3.86%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液 (1564:400:30:6) ; 柱温：室温。 紫外检测波长：254nm。 流速：10ml/min。 进样量:10μl （三）溶液的制备 1.对照品溶液的制备 取头孢拉定对照品适量(相当于头孢拉定约35mg)，用分析天平精密称定,置50m L容量瓶中,加水约6mL,再用超声仪，超声振荡5至10分钟，再振摇10分钟，保证对照品能完全溶解,再加流动相稀释至刻度,摇匀,静置，作为头孢拉定对照品溶液。 2.供试品溶液的制备 取头孢拉定胶囊20粒，用分析天平精密称定重量后,倾出胶囊内的内容物(不得损失囊壳),用小刷拭净囊壁上的残留内容物。分别精密称定囊壳重量,求出平均装量。取装量差异项下的内容物,精密称取适量(相当于头孢拉定70mg),置100m L容量瓶中,加流动相70mL, 再用超声仪，超声振荡5至10分钟，再振摇10分钟,使头孢拉定供试品细粉完全溶解,再加流动相稀释至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤,弃去初滤液，留下续滤液，静置。即得头孢拉定供试品溶液。 （四）方法学考察 1.线性关系考察 精密量取上述“对照品溶液的制备”项下的溶液，配成0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/m L系列浓度的溶液,分别移取10μL，依照上述色谱条件，依次进样。分别记录不同浓度的头孢拉定对照品溶液的峰面积，以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，峰面积的计算是由工作站采用峰面积归一化法，每个浓度测定3 次，以峰面积的平均值对浓度进行线形回归。写出线性回归方程及相关系数r。根据回归方程，判断线性关系是否良好。 2.重复性试验 取同一批号的头孢拉定胶囊20粒,按照“供试品溶液的制备”项下的方法，平行制备6份供试品溶液,6份供试品溶液分别过膜，取过膜后的滤液10μL，按选定的色谱条件，分别进样,注入高效液相色谱仪中，记录峰面积,测定并计算含量。根据样品的色谱图峰面积计算相对标准偏差RSD值。判断方法是否具有良好的重复性。 3.回收率试验 取适量的头孢拉定供试品,研细,取6份，每份精密称定。分别精密加入等量的头孢拉定对照品,按照“供试品溶液的制备”项下的方法平行制备6份供试品溶液, 6份供试品溶液分别过