血液细胞组织化学幻灯片.ppt

非特异性酯酶染色 原理 非特异性酯酶是作用于短链脂肪的酶，当酯酶活性存在时，水解基质中的α－醋酸萘酚，与重氮盐偶联，生成不溶性的有机产物，定位于胞浆上。 试剂 甲醛： 基质液： 1/15M的磷酸缓冲液 PH7.4 40ml 10g/L α－醋酸萘酚50％丙酮液 0.8ml 重氮盐（Diazo blue B） 40mg 方法 新鲜涂片用甲醛蒸汽固定5分钟。 流水冲洗5分钟，晾干。 置于基质液中37℃1小时，水洗泡10分钟。 20g/L甲绿复染20－30分钟。 水洗，晾干，镜检。 临床意义 单核细胞系统呈阳性，伴随着细胞的成熟而加强，对AL有鉴别诊断作用。 非特异性酯酶-氟化钠抑制试验 同非特异性酯酶，只是在1ml作用液中，加入1.5mg 氟化钠，即可抑制单核细胞的酯酶，故可作急性单核细胞白血病的鉴别诊断。 急性白血病中的组化染色 白血病 POX NSE PAS ALL — + + AML M0 + — — M1 + (3原始细胞) — — M2 ++ — — M3 +++ + — M4 + +（原单细胞） — M5 —/+ ++ —/+ M6 +（原粒细胞） — +（幼红细胞） M7 — + + 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（AKP） 目的 鉴别白血病（低）和白血病样（高）反应 鉴别淋巴肉瘤（高）和何杰金病 鉴别细菌性感染（高）与病毒性感染 分布 血细胞的碱性磷酸酶活性，主要见于成熟的中性粒细胞，定位于胞浆中。 原理 细胞中的AKP在PH9.5－9.6缓冲液中能使基质中的磷酸萘酚钠水解，释放出萘酚。后者与一种稳定的重氮盐（常用有固紫Fast--Garnet，GBC或固蓝RR）偶联，生成不溶性的偶氮染料，沉积于细胞上。 试剂 95%乙醇 固酱紫GBC AS-BI磷酸萘酚12.5mg + DH2O100ml 0.2M tris缓冲液：三羟甲基氨基甲烷2.43g+DH2O溶至100ml。 0.05M tris 缓冲液（PH8.6-9.0）：0.2 M tris 缓冲液25ml+ 0.1M HCL 49ml 贮存液：50ml AS-BI磷酸萘酚+PH8.8 0.05Mtris缓冲液50ml混匀，冰箱保存 1%甲基绿 血液细胞化学染色检测方法与应用 Shi Qing 概述 细胞化学染色是在组织化学的基础上发展起来的一个学科分支，是细胞学与化学相结合而形成的一门科学，研究细胞的化学成分，在保存血液细胞形态的基础上，在细胞原位显示化学反应的结果，根据化学反应的原理，研究细胞成分的化学性质。 研究目的及临床应用 研究正常血液细胞的活动与生理功能 提高血液病的诊断和鉴别诊断水平 ?????? 确定急性白血病的类型 ?????? 有助于某些血液病的鉴别诊断 观察疗效和估计预后 ??探索某些血液病的发病原理及治疗机制 ?????? 标本的选择 ??????? BM片、血片、淋巴结印片、脾印片等均可作组化染色。 用于酶染色的标本应尽可能新鲜。 用于非酶染色的标本可在室温下放置1个月，如PAS标本。 固定的目的及方法 ??????? 目的 保持细胞生前的结构与化学成分，并使血膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏。 常用化学固定方法 甲醛蒸汽固定：将滤纸平铺于染色缸底部，加入少许40%甲醛溶液。将涂片标本放入缸内，加盖使甲醛蒸汽固定血膜5-10分钟，水洗后晾