酶促反应动力学.ppt

2.3.1.4 影响固定化酶促反应的主要因素 分子构象的改变 位阻效应 微扰效应 分配效应 （可用Kp 定量描述）链接 扩散效应 （可定量描述） 分配系数 (Kp)链接 分配系数：载体内外底物(或其他物质)浓度之比。 Kp的测定： 已知底物浓度(CS0 )，体积(V0)的溶液中，放入不含底物的一定体积的载体，并保持适宜条件，当达到平衡时，测定载体外溶液的底物浓度(Cs)。 2.3.2 固定化酶促反应过程分析 2.3.2.1 外部扩散过程 以表面固定化酶为例。 CS CSS 外扩散过程分析 外扩散速率： 达到平衡时， 即 酶促反应速率： N, r rmax Nmax 0 CSS CS (CSS，rout) Nmax N，r rmax 0 CSS CS (CSS，rout) 竞争性抑制反应机理： 快速平衡法推导动力学方程： 解之，得 ， 式中: 采用稳态法推导动力学方程： 解之，得 式中: 非竞争性抑制反应机理 快速平衡法推导动力学方程 解之，得 式中: 稳态法推导动力学方程： 解之，得 式中: 竞争性抑制 非竞争性抑制 令 可变形为: 可变形为: 令 竞争性抑制 非竞争性抑制 1／r 1／CS 1／rmax -1／Km -1／Km’ 1／r 1／CS 1／rmax -1／Km CI = 0 CI 1／rmax’ CI = 0 CI 产物抑制：酶促反应中，有时随产物浓度提高，产物与酶形成复合物，阻碍了底物与酶的结合，从而降低了酶促反应的速度。 反应机理： 快速平衡法推导动力学方程: 解之,得 式中: 稳态法推导动力学方程: 解之,得 式中: 可见,产物抵制属于竞争性抵制 底物抑制：对于某些酶促反应，当底物浓度较高时，反应速率呈下降趋势，称为底物抑制。 CS CS r 底物抑制反应机理： 快速平衡法推导动学方程： 解之,得 式中: 2.2.3 多底物酶促反应动力学 一般的多底物酶促反应可表示为： 这里讨论：双底物双产物情况 反应机制： 关键问题：底物A、B哪个先和酶结合？ 任何一个都有可能先与酶结合 （随机机制） A先与酶结合或B先与酶结合 两底物同时与酶结合 （可能性极小） 随机机制（分支机制） E EB EA EAB EPQ EP EQ E （不形成三元复合物）反应模型 EA E ＋A －A －P ＋P ＋B －B EQ －Q ＋Q E EG （ EG：修饰过的酶 ） 简单机制 E EA EAB ＋A －A ＋B －B EPQ －Q ＋Q EP E －P ＋P 双底物酶促反应动力学 反应机理： 解之，得 式中： 2.3 固定化酶促反应动力学 2.3.1 固定化酶促反应动力学基础 2.3.1.1 酶的固定化技术定义 酶的固定化技术是将水溶性的酶分子通过一定的方式，如静电吸附，共价键等与载体如角叉菜胶、离子交换树脂等材料制成固相酶的技术。 细胞的固定化技术: 为省去从微生物（或动、植物）中提取酶的操作，确保酶的稳定性，采用直接固定化微生物细胞、动植物细胞、组织技术。 物理吸附法 载体结合法 离子结合法 共价结合法 交联法 格子型 包埋法 微胶囊 2.3.1.2 酶和细胞固定化方法 交联法 E O E E O O O E 2.3.1.3 固定化对酶性质的影响 底物专一性的改变 稳定性增强 最适pH值和最适温度变化 动力学参数的变化 第二章 酶促反应动力学 主要内容 1、酶促反应动力学的特点 2、均相酶促反应动力学 3、固定化酶促反应动力学 4、酶的失活动力学 2.1 酶促反应动力学的特点 2.1.1 酶的基本概念 一、酶作为催化剂的共性 二、酶的生物催化特性 三、酶的调节功能 2.1.2 酶的稳定性及应用特点 一、酶的稳定性 二、酶的应用特点 2.1.3 酶和细胞的固定化技术 一、固定化技术的基本概念 二、固定化酶的特性 三、固定化细胞的特性 四、酶和细胞的