生物制药工艺学：第三章 生物制药工艺技术的发展.ppt

第三章 生物制药工艺技 术的发展 生物技术的四大支柱 酶的分类 （一）蛋白酶 （二）核酸类酶（R酶） （三）国际系统分类法 酶催化作用特性 1．高效性 2．专一性 3．反应条件温和 4. 酶活力可调节控制 酶的发酵生产 酶的生产是指经过预先设计，并且通过人工控制而获得所需要的酶的过程。 提取法：最早采用并且沿用至今的一种方法。提取法采用各种技术，直接从动植物或微生物的细胞或组织中将酶提取出来。该法简单易行，但必须要有充足的原材料。 发酵法：发酵法主要通过微生物发酵来获得人们所需要的酶。 化学合成法 微生物酶发酵生产概念 微生物酶是指在人工控制的条件下，有目的利用微生物培养来生产所需要的酶，其技术包括培养基和发酵方式的选择及发酵条件的控制管理等方面的内容。 生产流程 优良产酶菌种的筛选——基因工程菌（细胞）的构建——微生物酶的发酵生产 微生物 大肠杆菌：大肠杆菌也是最早用作基因工程的宿主菌；工业上生产谷氨酸脱羧酶、天冬酰胺酶和制备天冬氨酸、苏氨酸及缬氨酸等。 枯草芽孢杆菌：工业发酵的重要菌种之一。生产淀粉酶、蛋白酶、5’-核苷酸酶、某些氨基酸等。 根霉：产生一些酶类，如淀粉酶、果胶酶、脂肪酶等。在酿酒工业上常用做糖化菌。有些根霉还能产生乳酸、延胡索酸等有机酸。 曲霉：制酱、酿酒、制醋的主要菌种。是生产酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、果胶酶）的菌种。生产有机酸（如柠檬酸、葡萄糖酸等）。农业上用作生产糖化饲料的菌种。 动、植物细胞 植物细胞 用于色素、药物、香精、酶等次级代谢物的 生产。 动物细胞 用于疫苗、抗体、激素、多肽、酶等功能蛋白的生产。 产酶工艺条件及其调节控制 酶蛋白质工程的策略 分子裁减 定点突变 对随机诱变的基因库进行定向的筛选和选择 杂交酶（hybridenzyme） ——利用高度同源的酶之间的杂交 ——创造具有新活性的杂交酶 固定化酶的特点： (2)包埋法：将酶包埋于凝胶或高分子聚合物网格内 常用的包埋剂有聚丙烯酰胺、卡拉胶、淀粉凝胶、 三醋酸纤维素、海藻酸、胶原、血纤维和大豆蛋白等。 1、凝胶包埋法（胶格包埋法）（网格型）将酶分子包埋在高聚物网格内的包埋方法。 聚丙烯酰胺包埋是最常用的包埋法 卡拉胶 海藻酸钠、胶原和明胶也是常用的包埋载体。  2、微囊化包埋法（微囊型） 微囊法主要将酶封装在胶囊、脂质体中。 微囊型固定化酶通常是直径为几微米到几百微米的球状体，颗粒比网格型要小得多，比较有利于底物和产物扩散，但是反应条件要求高，制备成本也高。胶囊和脂质体主要用于医学治疗。 作为膜材料的高聚物有硝酸纤维素、聚苯乙烯和聚甲基丙烯酸甲酯等。 包埋法优点： 一般不需要与酶蛋白的氨基酸残基进行结合反应，很少改变酶的高级结构，酶活回收率较高 可进行大量的固定化；包埋膜可选用生物相容材料，并可做成任意大小 包埋法缺点： 在发生化学聚合反应时包埋，酶容易失活 包埋法只适合作用于小分子底物和产物的酶 共价结合法优点： 载体与酶偶联的方法多样化；酶与载体结合牢固，一般不会因底物浓度高或存在盐类等原因而轻易脱落。 共价结合法缺点： 反应条件苛刻，操作复杂 偶联试剂对生命组织多有一定毒性 由于采用了比较激烈的反应条件，会引起酶蛋白高级结构变化，破坏部分活性中心（酶活回收率30％左右） 底物的专一性等酶的性质可能会发生变化 (4)交联法：是使用双功能或多功能试剂与酶分子之间进行分子间的交联反应的固定化方法。此法与共价结合法一样也是利用共价键固定酶，所不同的是它不使用载体。 交联剂：形成希夫碱的戊二醛，形成肽键的异氰酸酯，发生重氮偶合反应的双重氮联苯胺或N,N’-乙烯双马来亚胺等。 参与交联反应的酶蛋白的功能基团：N-末端的α-氨基、赖氨酸的ε-氨基、酪氨酸的酚基、半胱氨酸的巯基和组氨酸的咪唑基等。 交联法的优缺点：优点是操作简便。缺点：反应条件比较激烈，固定化的酶活回收率一般比较低，常出现扩散限制，使用有一定难度。尽可能降低交联剂浓度和缩短反应时间有利于固定化酶比活的提高。 图10-1 固定化酶的模式 （a）离子结合；（b）共价结合；（c）交联；（d）聚合物包埋； （e）疏水相互作用；（f）脂质体包埋；（g）微胶囊； 各类固定化方法的特点比较: 酶反应器的基本类型　　 搅拌罐型反应器 其基本结构由容器、搅拌器及保温装置组成。有时也可在容器壁上装上挡板，以促进反应物的混合。 固定床型反应器　 把催化剂填充在固定床（填充床）中的反应器叫做固定床型反应器。适用于不含固体颗粒、粘度不大的底物溶液。 流化床型反应器 流化床型反应器是一种装