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《细胞生物学实验》教学大纲 一、课程基本信息 课程代码课程名称：细胞生物学实验 课程英文名称：cell biology experiment 课程所属单位： 生物与制药工程系生物技术教研室 课程面向专业：生物技术 课程类型：独立设课 先修课程：微生物学实验 学分：2.0 学时：30应开实验项目个数：8 二、课程性质与目的 训练学生熟练地掌握普通光学显微镜的结构、性能和使用方法，了解几种特殊显微镜和电镜的一般原理和使用方法；掌握显微镜临时标本的制备，会进行显微测量、细胞计数和染色体观察；初步能进行细胞生理观察、细胞化学成分显示、染色体标本制备；初步掌握细胞培养、细胞冻存与复苏、细胞融合等技术的原理和方法；了解细胞放射自显影技术的原理和操作步骤；掌握实验报告的书写和镜下绘图的技能. 三、课程内容与要求 实验一：实验名称液泡系和线粒体的活体染色学时数：3 基本要求：掌握活体细胞染色原理和相关技术，学会在普通显微镜下观察细胞形态，掌握生物绘图方法。 主要内容：以洋葱鳞茎为材料，分别用不同染色液染色，然后显微镜观察，分别绘图表示液泡和线粒体分布。 操作要点： 主要仪器设备：显微镜、光照培养箱，电子天平，解剖器皿 实验二：实验名称DNA、RNA的细胞化学学时数：3 基本要求：初步掌握用细胞化学方法进行细胞内DNA、RNA酸性蛋白和碱性蛋白等生物大分子的定性和定位显示技术与原理。 学习细胞内化学成分的检测方法。 主要内容：以洋葱鳞茎为材料，用FEULGEN和BRACHET反应使DNA和RNA被染色，然后显微镜下观察。绘图说明DNA和RNA的 分布。 操作要点：染色剂配制时要注意方法，以免影响实验效果。 主要仪器设备：显微镜、染色器皿、光照培养箱、解剖器皿、电子天平 实验三： 细胞核和线粒体的分离学时数：3 基本要求：通过细胞匀浆和差速离心的方法分级分离细胞的组分，了解其原理、过程及作用。 主要内容：以大白鼠为材料，用差速离心进行细胞核和线粒体的分级分离，并染色检测细胞核和线粒体得率。 操作要点：使样品保持在４℃． 主要仪器设备：高速冷冻离心机，解剖器皿，显微镜、动物培养房、电子天平。 实验四：植物染色体分带技术学时数：４ 基本要求：掌握植物细胞染色体分带原理和方法及意义。 主要内容：以洋葱为材料，按照去壁低渗法制备染色体标本，ＧＩＥＭＳＡ染色后显示Ｃ带、Ｎ带和Ｇ带，显微镜下观察、拍照进行带型分析。 操作要点：染色体标本准备后要干燥一周左右才能进行染色显示分带。 主要仪器设备：显微镜、解剖工具、显微摄影仪、光照培养箱、干燥箱 实验五：植物原生质体分离和活性鉴定学时数：4 基本要求：掌握原生质体的分离、提纯和鉴定技术。 主要内容：以绿豆或烟草幼叶为材料，酶解破壁制备原生质体，洗涤离心后用FDA染色，荧光显微镜下观察。鉴别有和没有活性的原生质体。并在再生培养基上培养进一步鉴别活性。 操作要点：注意无菌操作。 主要仪器设备：荧光显微镜、倒置显微镜、超净工作台、显微操作仪、灭菌锅、细菌过滤器、光照培养箱、电子天平 实验六：动物细胞培养学时数：8 基本要求：熟悉细胞培养过程的无菌操作技术。 初步掌握哺乳动物细胞的原代培养和传代培养的基本方法和主要操作步骤。 主要内容：将细胞传代培养，24小时后观察细胞贴壁和生长中形态变化，并染色鉴定死活细胞。 操作要点：注意无菌操作。 主要仪器设备：超净工作台、灭菌锅、倒置显微镜、CO2培养箱、电子天平、冰箱 实验七：动物凋亡细胞的检测学时数：6 基本要求：学习细胞凋亡的形态学特征和检测方法 主要内容：将培养动物细胞用吖啶橙／溴化乙锭染色法染色后荧光显微镜下观察，区分活细胞和凋亡细胞。 操作要点：染色后必须立即检测 主要仪器设备：荧光显微镜、生化培养箱、流式细胞仪、 实验八：胞饮作用观察 学时数：３ 基本要求：了解胞饮作用的全过程。 主要内容；将变形虫饥饿培养两天后用氯化钠溶液处理一段时间，染色后相差显微镜观察。 操作要点； 主要仪器设备：相差显微镜、动物培养房和培养装置 实验九：生物标本的制作和切片技术 学时数：３ 基本要求：掌握冰冻切片技术和生物样品的标本制作技术。 主要内容：将洋葱根用冰冻切片机切片，显微镜下观察，绘图说明细胞形态结构。 操作要点；材料要新鲜，取样后冰冻。 主要仪器设备：冰冻切片机、显微镜、光照培养箱 实验十：细胞中碱性磷酸酶的定位 学时数：６ 基本要求；掌握细胞中酶的定位和显示原理，掌握标本的固定、切片技术。 主要内容：将小鼠肾制成冰冻切片，染色后显微镜下观察。 操作要点：材料要新鲜，取样后冰冻。 主要仪器设备：冰冻切片机、显微镜、解剖器皿、染色器皿、动物培养房 四、学时分配 实验学时分配表 序号 实验项目（或内容）名称 实 验 实验类型 每组实验人数 说明 学 时 验 证