生物制药工艺学：第二章 生物制药技术基础.ppt

小肠： 是消化和吸收的场所，可制备糖蛋白、核 苷酸 酶、溶菌酶、胃肠道激素; 猪小肠粘膜：是生产肝素的原料，用十二指肠为 原料 可制取肝素、冠心病、脑心舒； 脑垂体：主要是各类激素，已用垂体为原料生产的药物 有缩宫素注射液(OX)、加压素及助产素等； 心脏：用心脏生产的药物主要有细胞色素C、辅酶Q10和 心血通注射液； 其他动物脏器:如肺、肾、胸腺、扁桃体、眼 球、鸡 冠等也都是重要的生物制药原料。 5、微生物菌种的选育与保存 一、菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买ATCC； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 划线分离法 细胞破碎的意义 细胞破碎技术：是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术。 细胞破碎与上游和下游工艺设计的关系 上游通过细胞的生理状态对细胞破碎效果产生影响；而下游则要考虑去除细胞碎片和细胞蛋白质的污染等对产品活性的影响。 细胞破碎过程中必须考虑的因素 细胞壁的坚韧程度 、目标产品的性质 、破碎的规模、 方法 、费用等 . 细胞破碎技术路线 细胞的类型 动物细胞：无细胞壁，有细胞膜。 植物细胞：分为初生壁和次生壁两部分。 微生物：细菌细胞壁由肽聚糖组成，它是难溶性的聚糖链（glycan chain），借助短肽交联而成的网状结构。 细胞壁结构对破碎的影响 微生物细胞和植物细胞外层均为细胞壁，细胞壁里面是细胞膜，动物细胞没有细胞壁，仅有细胞膜。 通常细胞壁较坚韧，细胞膜脆弱，易受渗透压冲击而破碎，因此细胞破碎的阻力主要来自于细胞壁。 不同细胞壁的结构和组成不完全相同，故细胞壁的机械强度不同，细胞破碎的难易程度也就不同。 细胞壁的组成与结构 微生物细胞的外围通常包括细胞壁和细胞膜。 细胞破碎方法 细胞破碎方法及原理 物理法 超声波法 将细胞放在低温下冷冻（约-15℃），然后在室温中融化，反复多次而达到破壁作用； 由于冷冻，使细胞膜的疏水键结构破裂，从而增加细胞的亲水性能； 另一方面胞内水结晶，形成冰晶粒，引起细胞膨胀而破裂。 对于细胞壁较脆弱的菌体，可采用此法。 酶解法 外加酶法 溶菌酶（lysozyme)能专一性地分解细胞壁上肽聚糖分子的β-1,4糖苷键，因此主要用于细菌类细胞壁的裂解。 酵母和真菌由于细胞壁的组分主要是纤维素、葡聚糖、几丁质等，常用蜗牛酶、纤维素酶、多糖酶等。 植物细胞壁的主要成分是纤维素，常采用纤维素酶和半纤维素酶裂解。 自溶法 诱发微生物产生过剩的溶胞酶或激发自身溶胞酶的活力，以达到细胞自溶的目的。 选择破碎方法的依据 细胞处理量； 细胞壁强度和结构(高聚物交联程度、种类和壁厚度)； 目标产物对破碎条件的敏感性； 破碎程度； 目标产物的选择性释放 （一）差速离心 Differential centrifugation 特点： 介质密度均一； 速度由低向高，逐级离心。 用途：分离大小相差悬殊的细胞和细胞器。 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体。 可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 2.等密度沉降 isopycnic sedimentation 用途：分离密度不等的颗粒。 特点： 介质密度较高，陡度大，介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度。 所需的力场通常比速率沉降法大10~100倍，往往需要高速或超速离心。 原理：样品各成分在连续梯度的介质中经过一定时间的离心则沉降到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的成分分离。 3、用葡聚糖凝胶（Sephadex）浓缩： 利用葡聚糖凝胶的高吸水性和分子量浓缩生物大分子溶液； 4、用聚乙二醇（PEG）透析浓缩： 将要浓缩的蛋白溶液放入适当孔径的透析袋内，然后在外面用PEG粉末吸水浓缩。 5、超滤浓缩： 膜法浓缩分离技术。在一定的压力下，当原液流过膜表面时，膜表面密布的许多细小的 微孔只允许水及小分子物质通过而成为透过液，而原液中体积大于膜表面微孔径的物质则 被截留在膜的进液侧，成为浓缩液，因而实现对原液的分离和浓缩的目的。 超过滤（ultrafiltration） 1.透析和超滤 2.密度梯度离心法（density gradient） 6、真空减压浓缩： 7、薄膜浓缩： 生物工业产品干燥的特点 特点 1.快速高效，加热温度不宜过高； 2.产品与干燥介质的接触时间不能太长； 3.干燥产品应保持一定的纯度，在干燥过程中不得有杂质混入。 生物工业产品干燥通常采用喷雾干燥、气流干燥、沸腾