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紫杉醇白蛋白纳米粒与雷公藤红素的制备研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：紫杉醇白蛋白纳米粒与雷公藤红素的制备研究 1 1、实验部分 2 2、讨论 6 文2：三羟乙基芦丁的制备研究 6 1 资料与方法 8 2 实验结果 9 3 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 紫杉醇白蛋白纳米粒与雷公藤红素的制备研究 文1：紫杉醇白蛋白纳米粒与雷公藤红素的制备研究 紫杉醇(paclitaxel，PTX)是一种有效的细胞微管抑制剂，能在细胞有丝分裂中抑制微管解聚，阻碍细胞增殖、抑制肿瘤生长[1]。在临床研究中，白蛋白结合型紫杉醇纳米粒(nab-PTX，又名Abraxane)表现出良好的抗肿瘤活性[2]，并且与一线用药吉西他滨联用时能显著提高患者的中位生存期[3]。但联用时高剂量的nab-PTX和吉西他滨将对人体产生了一系列的不良反应[4]。因此，亟需一种新的用药策略实现高效低毒的胰腺癌治疗效果。雷公藤红素(celastrol，CLT)作为传统中药的提取成分，被证明由多种途径实现抗肿瘤，包括抑制细胞核因子(NF-κB)的激活、下调抗凋亡蛋白Bcl-2和X-连锁抑制剂(XIAP)及上调Bcl-2相关X蛋白(Bax)等，以诱导细胞凋亡和自噬[5]。雷公藤红素能增强化疗药物，如紫杉醇、阿霉素的抗肿瘤作用[6，7]。因此，雷公藤红素联用紫杉醇可通过多种途径共同抑制癌细胞生长、促进癌细胞凋亡，从而有效治疗胰腺癌。本研究通过一系列处方筛选工作，成功制备了雷公藤红素与紫杉醇共载的长循环白蛋白纳米粒(CP-AN)，确保纳米粒的均一度和稳定性，并对其粒径、电位、纳米粒形态、包封率、载药量进行了表征。另外，还应用小鼠胰腺癌细胞Pan02，在细胞层面上对CP-AN的细胞摄取情况进行了初步的考察。 1、实验部分 仪器、试药与动物 1260infinity高效液相色谱仪(美国Agilent);ZetasizerNanoZS90激光粒度分析仪(英国Malvern);CytomicsTMFC500流式细胞仪(美国BeckmanCoulter);超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技股份有限公司)。雷公藤红素(CLT，成都MustBiotechnology公司，纯度98%);紫杉醇(PTX，成都精药科技有限公司);人血白蛋白(四川远大蜀阳药业有限公司);蛋黄卵磷脂e80(德国Lipoid);1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](DSPE-PEG，上海蓬素生物技术有限公司);胆固醇(成都科龙试剂公司);1，1-二十八烷基-3，3，30，30-四甲基茚二羰花青(DiD，美国Sigma)。小鼠Pan02胰腺癌细胞(获自ATCC，美国弗吉尼亚州) 方法与结果 (CP-AN)的制备 采用探头超声法制备PTX与CLTCP-AN。将总药物浓度·mL-1的CLT和PTX、DSPE-PEG及其他辅料按一定比例溶于800μL有机溶剂中，水浴超声溶解。磁力搅拌下，将有机相滴加到4mL含有一定比例的人血白蛋白(HSA)水相中，继续搅拌5min。用230W探头超声10min(3s、7s)，于37℃下减压旋蒸15min，即得CP-AN。处方筛选应用单因素法进行。 考察有机相溶解介质对CP-AN形成的影响，筛选了常用于探头超声法的氯仿、乙醇及其混合溶剂(表1)。结果显示:氯仿中适当加入乙醇有助于降低粒径，但同时会影响制剂的稳定性。因此，选择氯仿作为有机相溶剂。 表1不同有机溶剂对CP-AN性质的影响 考察HSA水溶液浓度1%、2%、3%对CP-AN形成的影响(表2)。结果表明:当白蛋白用量为1%～3%时，均能制得均一的纳米制剂，当白蛋白用量过少时(1%)，纳米制剂难以稳定超过24h。因此，选用2%HSA水溶液作为水相。 表2不同比例的人血白蛋白对CP-AN性质的影响 -PEG用量筛选 DSPE-PEG是常用于制备长循环脂质体的功能基团，其负电性同时有助于纳米制剂的稳定，考察了DSPE-PEG在制备过程中不同的用量对CP-AN特性的作用(表3)。由表3可见:适当加入DSPE-PEG可以在一定程度上降低粒径，进而降低纳米粒的表面电位，从而增强制剂的稳定性。故选定2%HSA的1/8用量的DSPE-PEG。 根据预实验，固定总药物浓度为·mL-1，考察CLT与PTX之间不同摩尔比对CP-AN性质的影响。由表4可知:在药物比例为1:2到2:1之间，随着PTX用量占比增大，白蛋白纳米粒的粒径有一定程度的增加。其中，当两药之比为1:1时，制剂兼具较小的粒径、理想的分布系数(PDI)与良好的稳定性。因而，选用CLT与P