药物分析课件3配体交换色谱.pptVIP

Chiral Pharmaceutical Analysis －色谱仪的基本组成及配体交换色谱 硅胶填料 机械强度好，高压下不易变形 填充床稳定 柱效高 反压低 柱寿命长 耐受pH范围窄pH2-8 表面呈现酸性，分离碱性化合物时拖尾 多孔聚合物 耐受pH范围宽pH1-13 在高pH分离碱性化合物峰形好 柱效低，柱床容易变形 其他无机填料 石墨碳 氧化铝 氧化锆 保留时间和调整保留时间 保留因子 分离因子和相对保留 谱带展宽和柱效 分离度 峰不对称性 为溶质在固定相中的分子数Ns和流动相中的分子数Nm之比 令流动相的体积为Vm，固定相的体积为Vs，可以把 与溶质在固定相和流动相间的分配系数（partition coefficient, K）相联系 可以由实验测得 a 称为分离因子，又称为选择性 混合物中两组份的分离度R 色谱手性分离发展史 1939，Henderson Rule 在乳糖上色谱分离外消旋樟脑衍生物 1952，Dalgliesh提出氨基酸在纸色谱上光学分离三点作用假说 1966，Gil-Au等用GC直接分离对映体 1971，Davankov和Rogozhin引入手性配体交换色谱 1972，Wulff和Sarhan制备出手性LC的酶模拟聚合物 1973，Hesse和Hagel制备出手性拆分的纤维素三乙酸酯 1973，Stewart和Dherty把琼脂糖键合BSA用于手性拆分 1974，Blaschke由光学活性单体合成出用手性LC的手性聚合物 1975，Gram等用手性冠醚发展出主-客体色谱 1979，Dirkle和House合成出第一个硅胶键合手性固定相 1979，Okamoto等合成出手性LC的螺旋形聚合物 1982，Allenmark等把琼脂键合的BSA用于手性LC 1983，Hermansson把硅胶键合的a1-酸性糖蛋白用于手性拆分 1984，Armstrong和DeMond制备出硅胶键合环糊精固定相 配体交换色谱 1961年，Helfferich将离子交换与配体化学两个领域结合，提出配体交换色谱概念。 用于配位的金属离子结合在聚合物载体上，待分离物通过与金属离子的配位络合作用或与金属离子络合的配体发生交换以实现分离。 可以分离氨基酸及其衍生物，羟基酸等。 1971，Davankov和Rogozhin将配体交换色谱成功应用于手性分离。 CLEC Static factors then determine which of the two complexes is most stable: one of the water molecules is usually sterically hindered from coordinating to the copper Other metals used but copper has the most wide application The complexation process is a comparatively slow one this is helped by running at elevated temperatures. The optimum temperature is around 50oC Limited to a-amino acids and similar compounds. b-amino acids are very difficult to separate by CLEC 手性配体交换色谱固定相 手性配体交换色谱涂覆固定相 将带有N-正烷基的手性选择子涂渍在反相C18柱上 将手性配体的线形聚合物涂覆在硅胶上 以聚合物为载体的手性配体交换色谱键合固定相 聚苯乙烯树脂 交联聚丙烯酰胺，聚甲基丙烯酸酯，聚乙酰胺 以硅胶为载体的手性配体交换色谱键合固定相 硅胶环氧化后与氨基酸的钠盐开环缩合 手性配体交换色谱流动相法 将某种金属离子配体加入流动相中，在非手性固定相上进行外消旋体的拆分 优点： 非手性固定相参与手性选择子与分离异构体的相互作用，具有较好的分离选择性 灵活可变，提供了较宽的变量范围，可以调整保留时间和选择性 缺点：重现性差 用于LEC CSP制备手性选择剂的化合物通常也可以用作手性流动相选择剂 手性配体交换色谱影响因素 手性选择剂影响 在手性中心附近需具有两个或以上的络合官能团 需要一个较大基团以产生空间排斥作用 在固定相上有较好的保留作用 需要光学纯 中心金属离子影响 峰拖尾现象可能由于对映体与金属离子的络合作用过强造成的 络合作用强弱与峰拖尾程度及手性识别能力有关 络合作用太弱时也不具备手性拆分能力 温度影响 流动相pH对分离的影响 有机改性剂的影响 介质的