糖类抗原125的检测方案设计.pdfVIP

糖类抗原 125的检测方案设计 1 临床病例 30 汤某某，女， 岁，自述头晕、心慌、乏力，尿频、月经量过 T 37 P 120 / R 34 / Wt 63Kg 多等症状，体格检查： ： ℃ ； 次分 ： 次分 ： ， 心音有力，心律齐，无杂音，出现腰疼，腿疼等放射性疼痛。于2021 3 16 年 月 日收入我院。 2 概述 糖类抗原CA125 是相对分子质量为200kD 的黏蛋白型跨膜糖蛋 白，它主要存在于胎儿体腔上皮分化来的心包膜和腹膜等组织内，也 125 可表达在健康女性的输卵管、卵巢、子宫内膜，糖类抗原 是诊断 卵巢癌并检测其复发可能性最敏感的指标，也是上皮性卵巢癌与子宫 内膜癌的良好肿瘤标志物，可以用于卵巢包块的良恶性鉴别。在浆液 性子宫内膜样癌、透明细胞癌、输卵管癌及未分化卵巢癌患者可出现 明显升高，但是黏液卵巢癌表现不明显。当卵巢癌复发时，在确诊前 几个月可以检测到CA125增高，特别是卵巢癌转移患者，血清中糖 125 CA125 类抗原 明显高于正常参考值。 测定结合盆腔检查可以提高 试验的特异性，动态观察血清CA125浓度有利于卵巢癌的预后评价 与治疗。 3 检测方法 本设计方案采用的是电化学发光法。 4 检验原理 本设计方案采用电化学发光夹心法进行检测。加入标本后与生物 素化的糖类抗原125单克隆抗体和钌一起孵育形成抗体夹心复合物， 然后再添加包被链霉亲合素进行第二次孵育，复合体与磁珠结合，将 反应液吸入测量池中，磁珠吸附在电极表面，未与磁珠结合的物质将 被去除，给电极加以一定的电压，并通过光电倍增器测量发光的强度， 最后仪器自动通过2点校正的定标曲线计算得出检测结果。 5 材料与方法 5.1实验仪器及材料 5.1.1检测试剂 检测采用的是罗氏原装配套试剂，试剂盒标记为CA125 Ⅱ。试 剂盒主要成分有：一瓶6.5ml的包被链霉亲和素的微粒 （透明瓶盖）， 0.72mg/ml包被链霉亲和素的磁珠微粒，防腐剂，一瓶9mL的生物素 化的抗CA125II单克隆抗体 （灰色盖子），浓度为1mg/L的生物素化 的抗糖类抗原125单克隆抗体，100mmol/L、PH值为7.4的磷酸盐缓 冲液，一瓶9ml的三联吡啶钌标记的CA125II单克隆抗体 （黑盖）， 浓度为1mg/l，含有防腐剂、pH为7.4的磷酸缓冲液100mmol/L。 5.1.2检测材料及实验仪器 25μL -100μL 6 加样枪一支 （ ）、移液管一支、定标液、稀释液、 x 380mL 系统缓冲液、6x 380mL 检测池洗液、PC/CC杯、清洗液、 60x 60反应杯、30x 120 的移液管、加样头、检测标本、平板观测器、 自动振荡混合器一台、高速离心机一台、垃圾盒等。 5.2操作步骤 5.2.1标本采集与处理 采血时需采用负压采血法采集患者血液标本，采血管需选用无抗 凝剂、普通红色血清管。 ①采血前的准备：在采血前认真核对患者的基本信息，如：姓名、 性别、年龄以及检查项目。 ②采血过程：在采血过程中患者需要配合采血者于坐姿或者卧 位，以便于采血者顺利采血。 ③标本的处理：在获得新鲜采集的血液标本十五分钟后，检验者 需通过4000r/min 离心三分钟获得本次实验所需的血清样本。肝素钠、 锂、铵,柠檬酸钠和EDTA-K3以及含有分离凝胶的血浆管都适用，当 使用柠檬酸钠抗凝时结时果需要增加10％。 ④血清样本必须用标准试管或有分离胶的真空管收集，避免使用 灭活的样本，添加叠氮化合物的样本和质控品均不能使用。 ⑤检测标本必须在两小时内处理。