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第二章菌种的来源第二节：母种的科学使用方法 一、接种 在无菌操作条件下，即在己灭菌的接种室（或接种箱内）和酒精灯火焰无菌 区内，将菌种移接于新制作的试管斜面培养基中央。 二、无菌操作概念 无菌操作是指在无菌环境和无菌区内进行操作的过程。 即接种室、接种箱内空间及菌种所暴露或者通过的空间，一定要彻底消毒灭 菌; 使用的各种接种工具、菌种管口及外壁、培养基一定要进行彻底消毒灭菌; 接种人员的衣服及双手彻底消毒灭菌、接种动作要迅速、时刻树立无菌观念; 在酒精灯火焰无菌区内进行操作。 CM三、培养菌丝（发菌） CM 接种后将试管放于25°C左右黑暗的条件下培养，3?5天可长出新生菌丝体，待菌丝 体长满试管斜面后，即为新制作的母种（试 管菌种转管不能超过4次，以免污染或退 化）。 菌种培养室条件是：保温条件好、温度适宜、避光、通风、清洁卫生、无污 染物。 四、菌种质量鉴定和保藏（一）鉴定标准 1、纯度：纯度高，无杂菌。 2、长势：菌丝健壮、浓密、分枝多、富有弹性、生命力强。 3、颜色：色泽纯正，洁白有光泽，无老化变色现象。 4、菌龄：转管次数不超过4次，保藏不超过6个月。可通过颜色、长势进 行判断。如菌丝不干燥、不收缩、不自溶。 5、均匀度：菌丝生长均匀、整齐。 （二）菌种的保藏 菌种是国家重要的生物资源，也是教学、科研和生产的基本材料。只有妥善 保藏，才能使优良菌种不污染、不退化、不死亡，长期用于生产。 菌种保藏的原理是：尽可能降低菌丝的生理代谢活动，使生命活动处于休眠 状态。 当菌丝长满试管斜面后，可放在2?4°C冰箱内保藏菌种。使用的前一天从 冰箱内取出，放25°C左右条件下，使菌丝恢复活力，待用。 但草菇、双抱菇、姬松茸需放10?15°C保藏。 （三）斜面低温保藏法： 1、选择适当的培养基 马铃薯葡萄糖培养基（PDA）o 马铃薯葡萄糖综合培养基（CPDA）。 2、将试管菌种放入2?4°C冰箱内。也可放于水井、冷库、冰窑等低温处保 藏。 3、低温保藏的优点：简便易行，可随时观察菌种变化情况，如有无污染、 死亡、变异、退化等。 4、低温保藏的缺点：保藏时间短，一般可保藏3?6个月。 四、菌种的科学使用方法 -代母种二代母种 三代母种⑹⑹(6)⑹ 说明： 为一代母种，可转接60?100支二代母种。 、(3)、(4) (5)均为二代母种。 可用液体石腊低温保藏5?7年。 、(4)可放2?4°C冰霜低温保藏6个月。 用于转接第三代母种。 为第三代母种，用于生产二级菌种。