实验二细胞培养的基本知识和准备.pptVIP

人们发现由于空气中的二氧化碳浓度很低，(万分之2-3)，如果细胞不在二氧化碳培养箱中培养，培养液中的pH发生变化，这样会影响细胞的正常生长。所以大部分动物细胞的培养，还是需要二氧化碳培养箱。 HEPES的使用 HEPES（分子量）一种弱酸，羟乙基哌秦乙硫磺酸，对细胞无毒性主要作用:防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下，观察细胞时培养基脱离了5%CO2的环境，CO2气体迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES使用终浓度一般为10-50mmol/L 细胞培养瓶盖离开培养箱则需拧紧，以保证CO2气体不迅速逸出 酚红的使用 酸碱指示剂 低于6.5:柠檬黄 6.5:黄色 7.0:橘红色 7.4:红色 7.6:桃红色 7.8:紫红色 按照细胞生长情况，选择最适合的培养液； 摸索需要补加的成分及添加量； 培养体系的酸碱度； 适当换液。 培养液体与液体上方的空间的体积比为 1:10为宜。液体的高度最好维持在 2-5mm，以便于气体交换 3. 严格的无菌无毒操作 细胞培养注意事项 细胞培养失败原因 培养条件 供体本身 第二部分. 细胞培养前的准备 橡胶塞和塑料制品的清洗 培养用具的清洗 培养用具的包装 培养用具的消毒和灭菌 玻璃器皿的清洗 物理方法 化学方法 细胞培养实验室条件 、设备和器具 I II 一、培养用具的清洗 （一） 玻璃器皿的清洗 玻璃器皿在培养过程中用量大，重复使用频率高，要求严格清洗，特别是与细胞直接接触的各种培养器皿，即使含有微量的化学物质，都会对细胞生长不利。 有害物质包括：解体的微生物、细胞残留物以及非营养成分的化学物质 玻璃器皿的清洗一般包括浸泡、刷洗、泡酸和冲洗四个步骤。 1.浸泡 目的：软化器皿表面附着的物质，同时清除玻璃因为生产工艺而残留的碱性物质和其他有害物质。 方法：一般是在清水（或加有洗涤剂）中浸泡数小时，再经简单的刷洗，然后在5％稀盐酸溶液中浸泡12 h 以上。 注意：污染的瓶子或者培养肿瘤细胞的瓶子，要在2％来苏尔中浸泡过夜。 来苏尔为甲酚、植物油、氢氧化钠的皂化液，含甲酚50%。无色或黄色液体 目的：去除表面杂质 方法：使用软毛刷，将浸泡后的器皿在洗涤剂中反复刷洗，用力要轻。忌用粗糙的工具抠刮器皿的表面，以免损伤表面并且造成划痕。刷洗不要留下死角。刷洗结束后，用自来水充分冲洗，晾干。 3.泡酸（浸酸） 目的：利用洗液的强氧化性，去除器皿表面可能存在的有机物。新的或者重复使用的器皿一般都需要泡酸，一些无法用毛刷刷洗的物品（如吸管等）通常也主要靠泡酸来去除污物。 方法：将干燥的器皿（？）完全浸入洗液中，培养瓶、试剂瓶等容器要完全充满酸液。浸泡时间应该在6小时以上，最好过夜。 注意安全，防止损伤皮肤、眼睛、衣物！ 洗液：由重铬酸钾、浓硫酸和水配制的清洁液，具有强氧化性和腐蚀性。 配制过程中可使重铬酸钾溶于水中，冷却后，慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒搅拌，使产生的热量挥发，配成后清洁液一般为棕红色。切记：是酸加入至水中，而非水加入至酸中，否则产生水加入热油的后果 酸缸是用来装硫酸或重铬酸钾与硫酸的混合液、硝酸、盐酸等液体的容器，用来浸泡实验器皿与液体的储存 ，有玻璃、陶瓷、聚氯乙烯（PVC）等材料做的酸缸 食用油着火时怎么办?　 ?家庭中常用的油，以食用油为主，最常见的是油锅起火。起火时，要立即用锅盖盖住油锅将火窒息，切不可用水扑救。因为油的比重比水轻，浮于水面之上仍能继续燃烧，水往别处流动，会把火势蔓延。也不可以用手去端油锅，以防止热油爆溅、灼烧伤人和扩大火势。如果油火撒在灶具上或地面上，可以用砂土盖上，或用泡沫灭火器、干粉灭火器扑灭，还可以用湿棉被、湿毛毯、湿衣服等捂盖灭火。 电脑、电视机着火 电脑、电视机着火应马上拔下电源，使用干粉或二氧化碳灭火器扑救。如果发现及时，可以在拔下电源后迅速用湿地毯或棉被等盖住电脑。切勿向失火电脑泼水，否则会因为电脑或电视机温度突然下降而发生爆炸。其他电器发生火灾时，首先要切断电源。在无法断电的情况下千万不能用水和泡沫扑救，因为水和泡沫都能导电，应选用二氧化碳、1211、千粉灭火器或者干沙土进行扑救，而且要与电器设备和电线保持2米以上距离。  使用过程中要注意防护，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，严防洗液对眼睛、皮肤和衣物的伤害和损坏。 洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。 4.冲洗 目的：泡酸后的器皿必须用大量自来水冲洗，以