医学免疫学实验.ppt

医学免疫学实验 第3次 免疫标记技术细胞免疫体外检测 录像（免疫标记技术） ELISA（操作，间接法检测抗-HBs） E-花环试验、淋巴细胞转化试验、大、小吞噬细胞（示教） Immunofluorescence, IF 酶联免疫吸附试验Enzyme-Linked Immunosorbent Assays (ELISA) 用酶标记抗原(或抗体)检测抗体(或抗原)。 检测敏感度：ng/ml 固相载体： 聚苯乙烯微量反应板 标记酶 辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸酶(AP) 酶标仪读OD值 Sandwich ELISA indirect ELISA 间接ELISA法检测血清抗-HBs 步骤 加血清及对照 第1孔，阴性对照，加阴性对照血清1滴 第2孔，阳性对照，加阳性对照血清1滴 第3孔，待检血清，加待检血清50l 第4孔，空白对照 加酶结合物 每孔加入酶结合物1滴（空白孔不加），混匀，封板，37C 30min 洗板 弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5 sec，甩干，重复3次。 显色 每孔加显色液A、B各1滴，混匀，封板，37 C 15min 观察结果 免疫细胞功能检测 E花环形成试验 淋巴细胞转化试验 大、小吞噬细胞 T cell CD2（SRBC receptor） E花环形成试验 淋巴细胞转化试验 T细胞 PHA 淋巴母细胞 （体积增大，形态不整齐，核大，松散，有核仁，胞浆变宽，出现空泡） 计算淋巴细胞转化率 正常：60～80％ 大、小吞噬细胞 大吞噬细胞－巨噬细胞 小吞噬细胞－中性粒细胞