现代生物技术应用在植物育种上应用.pptVIP

相关概念 原生质体：指除去细胞壁的细胞或是一个被质膜所包围的裸露细胞。 亚原生质体：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体。可以具有细胞核或没有细胞核 核质体：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体，即微小原生技击体 胞质体：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体 原生质体的分离和培养 无菌试管苗叶片 上胚轴和子叶 愈伤组织 培养细胞 酶解 纤维素酶和果胶酶 原生质体 原生质体培养 培养基 液体浅层培养 固体平板培养 固液双层培养 琼脂糖珠培养 培养方法 四、体细胞杂交 定义：将两个不同亲本的原生质体，经人工诱导融合并培养成植株的过程，统称为体细胞杂交（A+B） 几种不同的表述： 体细胞杂交：somatic hybridization 细胞融合:Cell fusion 无性杂交: asexual hybridization 原生质体融合：Protoplast fusion 超性杂交: Parasexual hybridization 超性融合: Parasexual hybridization 细胞工程: Cell engineering 1960年，Kocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功 1971年，Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株 1972年，Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种，是第一个植物细胞杂种 1974年，Kao将聚已二醇诱导融合法应用于植物细胞融合并取得了相应的融合技术 1978年，Melchers获得第一个属间细胞杂交（马铃薯+蕃茄） 1981年，Zimmerman发明电融合仪，并首次年出电融合概念 1987年，Schweiger建立单对原生质体电融合技术程序 体细胞和有性杂交的比较 比较内容 体细胞杂交 有性杂交 时 间 无季节限制 花期限制，特别是母本的花期 亲缘关系 一定程度上可以克服有性/嫁接不亲和性 受亲和性影响 结 果 细胞核、细胞质均可以重组、倍性增加 双受精，一般无细胞质重组，倍性不改变 理论上，任何细胞都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源，这对种质资源的开发和利用具有深远意义 融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制，为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径 体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统，在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组，从而产生新的核外遗传系统 原生质体培养和体细胞杂交的应用 获得新品种 创造新种质 转移有利性状和克服远缘杂交的障碍 作为基因工程的良好受体及进行突变体筛选的优良原始材料 五、植物细胞突变体的离休筛选 基因组突变：染色体数目的改变或细胞质基因组的增减 染色体突变：染色体较大范围的结构变化，涉及多个基因 基因突变：指范围在一个基因以内的分子结构的改变，按DNA改变方式有碱基置换、称雄突变、缺失突变和插入突变 （一）突变体的产生 在离体培养条件下，诱发突变的突变型和自发突变没有本质上的差别，一般有三个水平的突变： （二）突变细胞的筛选方法 直接选择法 正选择/负选择 间接选择法 正选择 用一种含有特定物质的选择培养基，在此培养基上只有突变细胞能够生长，非突变细胞不能生长，从而直接筛选出突变体。如除草剂、抗盐碱突变体的筛选，均可直接在培养基中加入一定浓度的除草剂或增加渗透压的物质。目前采用这一途径已从多种植物中筛选出可利用的体细胞变异体。 负选择 一种借助于与突变表现型有关的性状作为选择指标的筛选方法 Dorffling等以Pro类似物羟脯氨酸（HYP)为选择剂，获得了耐HYP的体细胞变异系，其抗寒性比供体亲本增强，且能稳定遗传 林定波等将锦橙株心细胞愈伤组织的悬浮细胞经γ射线照射，然后在高浓度散打脯氨酸培养基中培养筛选，获得了抗寒体细胞变异愈伤组织，并再生植株。鉴定显示，抗寒愈伤组织及其再生植株的抗寒性分别比供体提高1.4度和2.4度，突变系体内的Pro含量比供体增加了一倍 （三）突变性状遗传基础及其稳定性鉴定 遗传基础 稳定性 突变性状的遗传学基础 体细胞变异，除发生在染色体水平外，更多的是基因水平上的变异 从利用体细胞变异的角度，染色体变异大多是一些畸型变异，真正可利用的染色体变异十分有限 基因水平上的变异大多只是个别性状的改变，不会影响再生植株的正常生长发育。因此，从再生植株的 这些变异中有可能筛选有益的变异。 基因水平的变异从根本上讲是DNA大项突变或修饰状态的改变 突变性状的稳定性 对于单基因控制的遗传性状，大多数碱基突变可以稳定遗传而且符合孟德尔遗传分离规律，这一点已在水稻、烟草和玉米的体细胞变异中得以证实。 植物的许多性状特别是经济性状均由多基因控制，对于多基因控制性状的碱基突变可能由于技术上的复