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ACC 含量的测定 一、目的要求 了解 1-氨基环丙烷-1-羧酸 （ACC ）在乙烯生物合成过程中的作用，学习果 蔬组织中ACC 含量的测定方法。 二、基本原理 ACC 可被NaOCl 的碱性溶液氧化产生乙烯。乙烯在常温下是气体物质，可 测 直接用气相色谱法测定，然后根据ACC 向乙烯转化的效率，就可计算出果蔬组 织中ACC 的含量。 三、材料、仪器及试剂 检 （一）材料 梨、苹果、番茄等。 质 （二）仪器及用具 研钵、高速冷冻离心机、移液器、水浴锅、旋涡混合仪、旋转蒸发仪、样品 瓶 （20 mL ，带有密封橡胶塞）、离心管、试管 （25 mL ）、气相色谱仪。 液 （三）试剂 1．95%、80% 乙醇溶液 测 海 2 ．25 mmol/L HgCl2 溶液 称取67.88 mg HgCl ，用蒸馏水溶解、稀释至10 mL 。 上 2 检 3 ．5% NaClO-饱和NaOH （NaClO: NaOH 2: 1，v/v ）混合液 4 ．1-氨基环丙烷-1-羧酸 （ACC ） 四、实验步骤 质 （一）ACC 的提取与制备 称取5.0 g果蔬样品，置于研钵中，稍加研磨后，转入到试管中，加入10 mL 液 95% 乙醇溶液，煮沸浸提20 min ，冷却后于10 000×g离心15 min ，收集上清液。 再向残渣中加入10 mL 80% 乙醇于70 ℃浸提30 min ，离心，收集上清液。合并两 测 次浸提液，用旋转蒸发仪在40 ℃条件下将浸提液蒸发至干。向蒸发残留物中加 海 入2.0 mL蒸馏水振荡溶解，即为ACC制备液，于-20 ℃保存备用。 （二）ACC 含量的测定 检 上 取 1.0 mL ACC 制备液，置于容积为20 mL 的样品瓶中，加入40 µL 25 mmol/L HgCl2 溶液，用橡胶塞密封样品瓶，冰浴10 min 使温度平衡。再通过注 质 射加入0.2 mL 经冰浴预冷的5%NaClO-饱和NaOH （NaClO: NaOH 2: 1，v/v ） 混合液，迅速振荡5 s 后，放回冰浴平衡5 min ，顶空取1.0 mL 气体，用气相色 谱法测定乙烯生成量。 液 （三）ACC 转化率的计算 取同一处理果蔬样品ACC 提取液两份，其中一份加入20 µL 0.1 mmol/L 海 ACC 标准品作为内标物，按照前面叙述的方法进行测定。两份样品乙烯生成量 之差即为所添加的ACC 转化为乙烯的量。此外，根据所添加ACC 的量，计算 出理论上能够形成的乙烯的两，就可以计算出该处理的ACC 转化率 （R ），重