抗坏血酸过氧化物酶活性的测定.pdfVIP

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2022-12-13 发布于上海
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抗坏血酸过氧化物酶活性的测定.pdf

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抗坏血酸过氧化物酶活性的测定一、目的要求学习果蔬组织中抗坏血酸过氧化物酶活性的测定原理和方法。二、基本原理抗坏血酸过氧化物酶（Ascorbateperoxidase，APX；AsA-POD）是以抗坏血酸为电子供体的专一性强的过氧化物酶。APX 能催化抗坏血酸与H O 反应而被 2 2 氧化形成单脱氢抗坏血酸。随着抗坏血酸被氧化，溶液在波长290nm 处的吸光测度值下降，根据单位时间内吸光度值的减少，可以计算出APX 活性。三、材料、仪器及试剂（一）材料检梨、桃、番茄等。质（二）仪器及用具高速冷冻离心机、紫外分光光度计、研钵、试管、计时器、容量瓶（100mL、 200mL、1000mL）、电子天平。液（三）试剂： 1．100mmol/L、pH 7.5磷酸钾（K HPO -KH PO ）缓冲液 2 4 2 4 海测母液A （1mol/LK HP0 ）：称取174.18g 磷酸氢二钾，用蒸馏水溶解、定容 2 4 至1000mL。母液B （1mol/LKH P0 ）：称取136.09g 磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解、定容上 2 4 检至1000mL。取83.4mL 母液A 和 16.6mL 母液B，混合，调节pH 值至7.5，稀释、定质容至1000mL。 2．提取缓冲液（含0.1mmol/LEDTA、1mmol/L 抗坏血酸和2%PVPP）液称取2.9mgEDTA，17.6mg 抗坏血酸和2 gPVPP，用 100mmol/L、pH7.5 磷酸钾缓冲液溶解、定容至100mL。4℃预冷保存。 3．反应缓冲液（含0.1mmol/LEDTA 和0.5mmol/L 抗坏血酸）测海称取2.9mgEDTA 和8.8mg 抗坏血酸，用50mmol/L、pH7.5磷酸钾缓冲液溶解、定容至100mL。4℃预冷保存。检上 4．2mmol/LH O 2 2 取1.14mL 30%H O ，用蒸馏水稀释至100mL，混匀，即得200mmol/LH O 2 2 2 2 溶液。再取1.0mL 该溶液，稀释至100mL，即为2mmol/LH O 溶液。 2 2 质四、实验步骤（一）酶液制备液称取5.0g 果蔬组