肝脏激酶B1(LKB1)对树突状细胞功能的影响及其机制.pdfVIP

肝脏激酶B1 （LKB1 ）对树突状细胞功能的影响及其机制 摘要 肝脏激酶B1 （LKB1 ）是一种丝氨酸苏氨酸激酶，调节细胞生长发育及代谢。 编码LKB1 的基因是一种抑癌基因，在消化道类及肺癌等多种恶性肿瘤中都有发 现LKB1 的异常。目前，越来越多的研究表明，LKB1 在肿瘤免疫中发挥着重要 的抑癌作用，提示其在免疫反应中扮演着举足轻重的角色。作为免疫反应的启示 细胞，树突状细胞（Dendritic cells, DCs ）连接着固有免疫和适应性免疫，是监视 肿瘤生长和突变的重要细胞类型。但是，由于DCs 在体内稀少，分离困难，人们 对LKB 1 在DC 中的作用认识不足。本硕士课题针对这一薄弱环境，运用先进的 慢病毒质粒系统，在树突状细胞系DC2.4 中对DC 内固有的LKB 1 分子分别进 行了敲低和过表达的基因改造，并对改造后DC 的生物学功能进行了全方位的检 + 测。研究发现，DC 中的LKB1 不影响其对抗原的吞噬及交叉提呈给CD8 T 细胞 + 的能力，但可上调其刺激CD4 T 细胞增殖的能力，因为在与LKB1 过表达DC + 共培养的混合淋巴细胞反应（MLR ）中CD4 T 细胞数量显著增多，而向小鼠体 + 内注射LKB1 敲低的DC 可使其脾脏中进入增生周期的CD4 T 细胞数量减少。 在检测DC 中LKB 1 对T 细胞分化的影响方面，我们发现，过继输入改变了LKB 1 表达量的 DC 对体内调节性 T 细胞（Treg ）亚型的分化影响显著，具体表现在 LKB1 过表达的DC 明显抑制T 细胞向Treg 方向分化，而LKB1 敲低的DC 则产 生与之相反的结果。进一步探索DC 中LKB 1 影响体内Treg 分化的分子机制发 现，LKB 1 可抑制 DC 表面表达可刺激 Treg 增生的肿瘤坏死因子超家族成员 + OX40L 和免疫负调因子IL-10 的分泌。在影响体内CD8 T 细胞的功能方面，我 们发现注射LKB1 低表达的DC 到小鼠体内可使其分泌的颗粒酶和穿孔素减少， + 提示LKB1 的降低可使DC 介导的CD8 T 细胞杀伤肿瘤能力减弱，较易形成肿 + 瘤。综上所述，DC 中的LKB1 一方面抑制CD4 T 细胞向Treg 分化，促进了T 细胞的增殖，从而保持了一个相对较强的免疫应答能力；另一方面，LKB1 通过 + 维持DC 介导的CD8 T 细胞的功能来保证其对肿瘤的杀伤。此两方面相互结合， I 共同增强机体抗肿瘤的能力。这些发现解释了DC 中 LKB1 抑癌的免疫机制，可 为肿瘤以及相关免疫疾病治疗药物的开发提供理论基础。 关键词：肝激酶B1 ，树突状细胞，慢病毒转染，T 细胞增殖，T 细胞分化 II 目录 摘要 I Abstract III 主要缩略词表V 目录VI 1. 综述 1 1.1 LKB1 的发现 1 1.2 LKB1 的结构和功能 1 1.3 LKB1 与肿瘤3 1.4 LKB1 与免疫细胞4 1.5. 研究意义 10 2. 实验材料与方法 11 2.1 实验材料