口腔疾病分子生物学—分子生物学基础及基本研究方法.pptx

分子生物学研究的主要方法;目的及要求;分子克隆技术;（一）限制性内切酶;（二）DNA连接酶;质 粒;;构建质粒的特点;(四)噬菌体;（五）转化、转染、转导;转导;分子克隆的主要步骤;分子克隆常用技术; ;核酸杂交;Southern Blot;斑点杂交;PCR;与龋病相关微生物的定量检测方法;在人类口腔中检出率很高 茸毛链球菌可能比变形链球菌与龋损活跃性之间的关系更密切;抽提细菌染色体DNA(Igarashi et al.1996) ----细菌 ----唾液 PCR反应过程 第一次PCR反应 预变性: 94℃ 4min 变性: 94℃ 1min 退火: 51℃ 1min 30cycles 延伸 : 72℃ 2min 最后延伸: 72℃ 5min 第二次PCR反应;套式PCR(Nested PCR );本套式PCR的引物是分别根据变形链球菌gtfB基因和茸毛链球菌gtfI基因设计的内、外两套引物（outer primer,inter primer）; ; 2.0 0.5 ; ;; ; ;结论　套式PCR 能快速在人类唾液中同时检测变形链球菌和远缘链球菌。该检测方法有 望运用于临床检测,对揭示两种细菌与龋病发生关系的研究具有一定价值。;生命的主要遗传物质-DNA DNA的复制 基因表达 中心法则 基因表达的调节;目的及要求;Mid-19th Century; 1869;1910;;一、生命的主要遗传物质----DNA;核酸的组成、分布及基本化学结构;DNA与RNA的区别;DNA结构的推衍;DNA的复制;DNA多聚酶种类;DNA复制的方式;基因;基因的表达;RNA（单链）;RNA的生物合成——转录;2.RNA多聚酶与启动子 启动子：能特异性地与RNA多聚酶结合，引发RNA合成。 从DNA上特定起始序列（启动子）开始，至终止信号结束 3.转录的起始与延伸;4.内含子和外显子的概念 原核生物：基因是连续的DNA片段 真核生物：基因由若干个不连续的DNA片段组成的。 内含子：插入序列，它是位于基因的内部，能够被???录的一段DNA。但在转录后，与之相应的那部分转录产物在拼接中被去掉了。 外显子：基因中与成熟的mRNA相对应的DNA片段，它不仅包括蛋白质编码的部分，而且包括5’和3’末端不翻译的前导序列和尾随序列。;釉原蛋白基因表达示意图;遗传密码的性质 所有的密码都是由三个连续的核苷酸组成，相邻的两个密码之间没有间隔的核苷酸存在 3个终止密码子UAA,UGA,UAG，起始密码子：AUG 密码子具有兼并性 通用性;蛋白质的生物合成——翻译;蛋白质的生物合成——翻译;基因表达;中心法则;基因表达的调节;基因表达调控的原因动力;基因表达调节的方式;乳糖操纵子学说;Britten-Davidson模型