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- 2023-03-08 发布于上海
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酪氨酸酶的提取和活性测定
酪氨酸酶是酚氧化酶类之一,酚氧化酶在氧存在下,使酪氨酸及其他一元酚的衍生物,如对
-甲酚、邻-甲酚、焦儿茶酚、酪胺等氧化反应生成黑色素。
1.仪器设备
研钵、分光光度计、离心机等。
2. 操作方法
1)酶粗制剂的提取
(1)用水提取法或甘油浸泡法均可从植物材料中 (如小麦和黑麦的麸皮)获得酶提取液。
必要时可再用酒精或丙酮沉淀法或硫酸铵部分沉淀法将水提取液进一步提纯。
(2)将切碎洗净的马铃薯小块置于研钵中,加少量干净的石英砂与水共同研磨,经短时间
浸泡后将材料压榨、离心或过滤,将所得的液体挤净,上清液 (或滤液)可供测酶活用。由于铁
是酶作用的接触剂,因此材料切碎时,尽量避免使用金属器具。
(3)新鲜真菌如草的酪氨酸酶提取:材料加约两倍重量的甘油与石英砂共同研磨,然后在
有盖的玻瓶中浸泡一昼夜,经离心或过滤后的新鲜滤液,供测定用。
2)酶活性的测定
(1)巴赫方法:以略碱化的酪氨酸水溶液作基质,0.05g 酪氨酸溶于100ml 的0.04%的碳
酸氢钠溶液中,在水浴上稍加热。从中取出10ml 加入30ml 水,在38~40℃水浴或恒温箱中将
混合物加热,并加入5~10ml 水提取酶液或十分之几毫升的甘油酶提取液,在甲苯存在
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