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多酚氧化酶活性的测定 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌。多酚氧化酶活性可用氧 电极测量反应中的耗氧的速度，或用比色法测量产物的形成，常用的底物有儿茶酚 （邻苯二酚） 和多巴 （3，4-二羟苯丙氨酸）。 一、氧电极法 1.仪器设备 测氧仪、记录仪、磁力搅拌器、反应杯、超级恒温水浴、离心机、匀浆机、微量注射器。 2.操作方法 1）粗酶液的制备：称取马铃薯块茎20g，加入2g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮 （PVP） （事先用 蒸馏水浸洗，然后过滤以除去杂质）和 100ml0.1mmol/L 磷酸缓冲液 （pH6.5），于匀浆机中打碎 成匀浆，用尼龙网袋 （或纱布袋）过滤，滤液中加入30%饱和度硫酸铵，离心除去沉淀，上清 液再加硫酸铵使达60%饱和度，离心收集沉淀。将所得沉淀溶于少量0.01mol/L 磷酸缓冲液 （pH6.5）中，即为粗制酶液。 2）酶活性测定 （1）按测定光合速率方法所述，将测氧仪、记录仪、恒温水浴 （25℃）的管路以及电 （线） 路连接好，然后进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。 （2）测定酶的活性时，先于反应杯中倒入底物儿茶酚（0.11g 儿茶酚溶于1000ml 的0.1mol/L pH6.5 的磷酸缓冲液中，）