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酶联免疫法 （ELISA）测定CaM 总量 植物细胞组织中CaM 含量的测定在信号转导中十分重要。测定CaM 的方法中的酶学法和放 射免疫法各有利弊。这里介绍的植物 CaM 竞争 Elisa 定量测定方法，其原理是待测CaM （抗原） 与过量CaM 抗体结合，剩余的自由抗体通过与固相CaM 结合，其结合量以酶标记二抗的多少测 出，标记酶一般是过氧化物酶，酶催化加入的底物，生成有色产物，用分光光度法进行定量分析。 此方法较为简单、专一，重复性较好，同时可测出组织中的CaM 总量。 1.仪器设备 酶联免疫检测仪、恒温培养箱、微量加样器、聚苯乙烯酶标反应板。 2.操作方法 1）在酶标反应板孔内准确加入 100μl 植物CaM（10mg/ml）包被液[0.05mol/L 磷酸盐缓冲液， pH9.6 （0.19g磷酸钠，0.29g 碳酸氢钠，加水至100ml）]，置湿盒中于37℃下保温2h （4℃48h 以上）。取小试管，每只分别加入200μl经过稀释的系列标准CaM （每只试管中每100μl 反应液 中分别含有0、10、40、157、625、2500ng 标准CaM），再加入200μl稀释后的兔抗CaM 血清。 另取试管加入待测样品200μl，再加入200μl，稀释后的兔抗CaM 血清，全部混匀后，放入37℃ 中