高中生物人教版高中选修生物技术实践专题DNA和蛋白质技术血红蛋白的提取和分离课时.pptx

2014年我国蛋白质组计划正式启动水 分血浆固体物质：血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等血液白细胞血细 胞血小板血红蛋白（90％）红细胞（最多）血液有哪些成分？两个α－肽链血红蛋白两个β一肽链血红蛋白的特点：每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子O2或一分子CO2，血红蛋白因含有血红素而呈红色。 实验操作（一）蛋白质提取和分离步骤样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定选什么做提取血红蛋白的实验材料？用猪、牛、羊等哺乳动物成熟红细胞提取血红蛋白哺乳动物成熟红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。吸出血浆5倍体积生理盐水3g柠檬酸钠血 浆低速离心2 min红细胞红细胞缓慢搅拌10min（二）操作过程1.洗 涤 红 细 胞阅读思考：洗涤的目的是什么，洗涤方法，洗涤干净的标准？血液100mL重复洗涤3次，直至上清液没有黄色2.释放血红蛋白阅读思考：释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪些物质？为了加速释放过程，采取了什么措施？①目的分析：②蒸馏水的作用是______________________________。③加入甲苯的作用是____________________________。④充分搅拌的目的是____________________________。使红细胞大量吸水胀裂溶解红细胞的细胞膜加速红细胞的破裂磁力搅拌器返回脂类物质滤纸高速离心10min 过滤离心管3.分离血红蛋白分离过程红细胞混合液烧杯 缓冲溶液1.作用: 能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响，维持PH基本不变。进行体外实验时，可以防止蛋白质发生变性。2.缓冲溶液的配制: 通常由1－2 种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。3. 在本课题中使用的缓冲液是:磷酸缓冲液(pH为7.0),成分：磷酸二氢钠与磷酸氢二钠 4.透析 ①透析目的：除去样品中分子量较小的杂质。用缓冲液取代样品中的溶液。 ②过程：取1ml的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/l的磷酸缓冲液中（pH为7.0），透析12小时。 凝胶色谱法（分配色谱法）1.概念： 根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶，来进行分离。2.凝胶： 大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。3.凝胶色谱法的原理①相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢;②相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 分离过程 收 集大分子收 集小分子 混合物上 柱洗脱大分子流动快小分子流动慢洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 蛋白质提取和分离步骤1.样品处理2.粗分离3.纯化：凝胶色谱法4.纯度鉴定:SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳血红蛋白的提取和分离各操作的主要目的操作目的红细胞的洗涤血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液透析纯化血红蛋白的提取和分离各操作的主要目的操作目的红细胞的洗涤去除杂蛋白，如血浆蛋白血红蛋白的释放使红细胞破裂，释放血红蛋白 分离血红蛋白溶液经过离心使血红蛋白与其他杂质分离开透析除去样品中相对分子质量较小的杂质纯化除去相对分子质量较大的杂质蛋白质1．下列有关“血红蛋白的提取和分离”的叙述，正确的是(　　)A．血红蛋白的提取和分离一般分为样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定B．将血红蛋白溶液进行透析，透析时间至少为1～2 h，时间过长血红蛋白也会渗漏出去C．血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂D．用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除细胞表面的杂蛋白A巩固提升2．下列说法错误的是(　　)A．在释放红细胞中的血红蛋白时，加蒸馏水到原血液的体积，再加40%体积的甲苯，充分搅拌10 min，红细胞破裂释放出血红蛋白B．血红蛋白溶液离心后分为4层，第1层为白色薄层固体C．血红蛋白溶液离心后分为4层，第4层为暗红色沉淀物D．血红蛋白溶液离心后分为4层，第3层为红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液B巩固提升3．在蛋白质的提取和分离中，下列关于对样品处理过程的分析，无误的是(　　)A．洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B．洗涤时离心速度过低，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果C．洗涤过程选用0.1%的生理盐水D．透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质D巩固提升4.下关于猪血红蛋白提纯的描述,不正确的是 (　　)A.洗涤红细胞时,使用生理盐水可防止红细胞破裂B.猪成熟红细胞中没有细胞器和细胞核,提纯时杂蛋白较少C.血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测D.在