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《生物化学与分子生物学实验》教学大纲 一、本课程的基本概况 英文译名：Biochemical Experiments 课程性质：基础课程 适用专业、年级：本校各专业本科、七年制、硕士学生 学分数：5学分总学时数：本科生32学时；研究生30学时 教 材:《生物化学与分子生物学实验指导》第二版 李 林 张悦红主编 2009.8北京，人民卫生出版社出版ISBN 978-7-117-10181-3/R*10182 二、本课程实验教学的目的和基本要求 本课程是医学各专业本科生必修的专业技术基础实验课，通过实验教学要达到以下三方面的目的： 1.培养学生严谨的科学态度，开拓创新的思维能力，实验设计的思维方法，以及规范的书写实验报告论文等知识，提高分析问题和解决问题的能力。 2.掌握基本的生物化学实验方法和技术，通过本课程的严格训练，为学生进一步学习，掌握复杂的综合性的生物化学与分子生物学技术打下扎实的基础。 3.通过实验，进一步加深对生物化学与分子生物学理论知识的理解。 基本要求： 1.进入实验室的学生必需严格遵守实验室规则； 2.复习有关课堂讲授的理论知识； 3.根据实验教程，认真预习实验教程； 4.明确实验目的，掌握实验设计的原理； 5.认真对待每一次实验，真实记录实验结果并完成实验报告。 除此之外，鼓励学生自行设计实验或参与实验教学改革，思想活跃，积极与老师交流意见。 三、本课程教学中需注意问题 教师注意多巡堂，多启发，多指导，让学生多动手，多思考，并通过多媒体手段下载有关生化实验的最新方法和技术播放给学生观看，尽可能让学生了解本学科的前沿知识。 四、考核、考试方式 以本学期实验操作及报告考察情况为主，结合实验结束后的一次笔试、操作考核、考试综合评定成绩，或通过设计实验，进行综合考核、考试，结合平时的实验操作、实验报告综合评定成绩。 五、教学内容 实验一?酚试剂法测定血清蛋白质含量（改良Lowry法 ） 【目的与要求】 1.播放（本学期参加教学人员情况、实验室概括）录像，使同学对我室进行了解。 2.播放（实验室规则、生化常用仪器）录像，掌握生化实验室中的各项注意事项。掌握各种基本的生化技术、常用仪器的分类及使用。 3.掌握7200分光光度计的使用。 4.掌握测定可溶性蛋白质含量常规测定的原理和操作方法，正确绘制标准曲线，熟悉分光光度计、混匀器的使用。 实验二 几种理化因素对酶活性的影响 【目的与要求】 1. 掌握温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性影响的实验方法。 2. 了解不同酶其最适温度、最适pH不同。 3. 通过实验验证理论。 实验三 激素对血糖浓度的影响 【目的与要求】 1.掌握血糖测定的方法和原理。 2.掌握血糖含量的正常范围及生理意义。 3.熟悉血糖含量的调节机制，掌握肾上腺素和胰岛素对血糖含量的影响。 4. 掌握家兔的采血、注射药物的方法。 实验四 酮体的生成和利用 【目的与要求】 1.掌握检测酮体的基本原理和操作方法。 2.了解什么是酮体及其在体内的生成、利用部位。 3.通过实验验证理论。 实验五 肌肉组织氨基移换作用（纸层析法） 【目的与要求】 1.掌握纸层析法分离和鉴定氨基酸的原理和操作技术。 2.熟悉纸层析法的基本原理。 实验六?分子克隆技术实验 一 质粒DNA的提取（碱裂解法） 【目的与要求】 1.掌握碱裂解法制备质粒DNA的原理和方法,进一步认识质粒DNA的性质。 2.初步掌握分子生物学基本操作技术。 二 限制性核酸内切酶对质粒DNA的酶切作用 【目的与要求】 1.掌握限制性核酸内切酶图谱制作原理和方法 2.了解限制性核酸内切酶在基因工程中的应用 三DNA的琼脂糖凝胶电泳 【目的与要求】 学习并掌握DNA琼脂糖凝胶电泳基本原理和操作，了解如何通过电泳判断DNA纯度、含量和分子量。 四 感受态细菌的制备及质粒DNA的转化 【目的与要求】 1．了解细胞转化的概念及其在基因克隆操作中的意义。 2．掌握氯化钙法制备感受态大肠杆菌细胞和外源质粒转化的方法。 五Southern印迹杂交 【目的与要求】 掌握核酸分子杂交的原理和Southern印迹杂交技术。 六 聚合酶链反应（PCR）体外扩增DNA 【目的与要求】 掌握PCR的基本原理与实验技术。 实验七 血清丙氨酸氨基移换酶活性测定（赖氏法） 【目的与要求】 1.掌握血清丙氨酸氨基移换酶活性测定方法及临床意义。 2.通过实验验证理论。 实验八?醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质 【目的与要求】 1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理及操作方法。 2.了解醋酸纤维素薄膜电泳所分离的血清蛋白质的各带谱及其临床意义。 实验九?实验考试 【目的与要求】 1.结合本学期所做实验，出3-5道实验理论考题，考试时间10分钟。 2.结合本学期所做实验，设计一实验内容，进行操作考试，考试时间120