DB32-T 3762.7-2020新型冠状病毒检测技术规范 第7部分：空气样本检测与评估.docxVIP

DB32/T 3762.7—2020 PAGE I 新型冠状病毒检测技术规范 第7部分：空气样本检测与评估 范围 本部分规定了空气中新型冠状病毒的样本分类、现场采样、实验室检测和评估。 本部分适用于于新型冠状病毒肺炎流行期间空气中新型冠状病毒的检测，其它呼吸道病毒的空气样本检测可参照执行。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 WS 395 公共场所集中空调通风系统卫生学评价规范 DB32/T 3762.3-2020新型冠状病毒检测技术规范 第3部分：核酸荧光PCR检测程序 Doc9284-AN/905 危险品航空安全运输技术细则 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 呼出气冷凝液 exhaled breath condensate，EBC 一种高度稀释的体液，含有气道内衬液体及其可挥发成分，是肺内生化、炎症的标记物。EBC检测是一种无创检测呼吸道疾病炎症的方法，可以评价气道炎症和氧化应激程度，具有安全、可靠、简便、易行、重复性好等优点。呼吸道冷凝液微生物的检测，可用于鉴别病原菌。 样本分类 呼出气冷凝液 原理 采用呼出气低温冷凝加撞击的原理，采集呼出气中的生化物质及气溶胶颗粒。 仪器设备 呼出气冷凝液采集器：采集效率150μL/min，冷凝温度-10℃～0℃，预冷时间3 min～5min。 波纹管：一次性，可伸缩。 冷凝盒：一次性。 冻存管：2mL。 室内空气、空调送风、空调新风和室外排风 原理 采用旋风分离式与撞击式相结合，将空气中的颗粒物直接采集到液体中，检测采集样本中的病毒。 仪器设备 便携式小流量生物气溶胶采样器：流量14 L/min～20L/min，切割点0.5μm，采集液3 mL～5mL，时间自设。 便携式大流量生物气溶胶采样器：流量≥300L/min，切割点0.5μm～0.8μm，采集液3 mL～15mL，时间自设。 采样头：一次性，和仪器配套。 采样桶/采样瓶：和仪器配套。 采集管：一次性，3 mL～15 mL。 冻存管：3 mL～15 mL。 气溶胶采集液 病毒咽试纸采集液或者无菌水。 现场采样 采样人员防护 穿戴工作服、一次性工作帽、一次性手套、防护服、KN95/N95 及以上颗粒物防护口罩或医用防护口罩、 防护面屏或护目镜、工作鞋或胶靴、防水靴套等。 点位分布 发热门诊、ICU病房、普通病房、护士站、病房走廊、实验室、CT室、集中空调通风系统送风与新风口、室外排风口。 布点原则 集中空调通风系统按照WS/T395进行设点；普通病房≤100间，抽取病房数量的3%～5%进行布点；普通病房100间，抽取病房数量的1%～3%进行布点。室内面积不足50m2的设置1个采样点，50 m2～200m2的设置2个采样点，200m2以上的设置3～5个采样点。 采样点按均匀布点原则布置；距离地面高度1.2m～1.5m，距离墙壁不小于1m；避开通风口、通风道等；同时考虑离传染源远近。 样本运输 新型冠状病毒空气样本运输包装分类属于B类，对应的联合国编号为UN3373，包装符合国际民航组织文件Doc9284《危险品航空安全运输技术细则》的PI650分类包装要求；通过其他交通工具运输的可参照以上标准包装。 实验室检验 负压P2实验前准备 消毒剂：75%乙醇、0.55%含氯消毒剂（需每天新鲜配制）：缓冲间有效氯1瓶；核心区生安柜内75%乙醇、有效氯各1瓶，生安柜外75%乙醇、有效氯1瓶。 进入P2实验室，检查垃圾袋、纸巾、Tip头、冻存管、冻存盒、EP管、封口膜、标签笔、一次性乳胶手套、核酸提取试剂数量，不足时应及时补充。 在生安柜内铺一次性软吸收垫；在垃圾缸内放置垃圾袋，倒少量含氯消毒剂。 负压P2实验过程中 应在生安柜内两人同时操作。 取出待检样本，在生安柜内打开密封袋，核对送检单，在样本管上标记，注明采样地点、日期、样本类型等。若管壁外有不明液体，应用有效氯消毒剂擦拭。 暂不检测样本放转运冻存盒，预留待检测样本放置位置。 对于未分装拭子样本需进行分装，分装于2 mL带螺旋盖内有垫圈冻存管。所有样本旋紧管盖后需用封口膜密封。 废弃Tip头打入含氯消毒剂的废液缸中，注意需浸入液体中。 将核酸提取试剂槽样本孔（第一孔）中的裂解液吸出至1.5mL EP管中，每管加入20μL用于病毒DNA/RNA提取的蛋白酶K和200μL样本，在涡旋器上充分振荡混匀后室温孵育10min。 将EP管置于离心机中短暂离心（12000rpm×10min），离心完成后将EP管中裂解后的样本吸回至核酸提取试剂槽的样本孔（第一孔）中。 将试剂槽加套管置入全自动核酸提取仪中进行核酸提取。 剩余样本旋紧管