食品生物化学实验指导 课件 第八章 综合性实验 实验五 辣椒红色素提取与层析.pptx

食品生物化学实验指导 实验五 辣椒红色素提取与层析 第八章 综合性实验 一、实验目的 1. 了解辣椒红色素的性质与用途; 2. 掌握辣椒红色素的提取方法; 3. 掌握薄层层析分析混合物的原理与操作; 4. 掌握柱层析分离混合物的原理与操作。 二、实验原理 红辣椒含有几种食用天然色素，主要有辣椒红素、辣椒玉红素和β-胡萝卜素。由于它们在硅胶G和二氯甲烷做成的层析板中的吸附能力不同，因此可以将它们吸附分离出来。同样在柱层析中分离出不同的色素，这样色素的纯度会比较高一点。 三、实验试剂与器材 1. 材料 红辣椒。 2. 试剂 二氯甲烷，薄层层析硅胶，柱层析硅胶。 3. 仪器 回流装置、薄层层析缸、玻片、层析玻璃柱、长滴管、点样毛细管。 四、实验步骤 1. 制备色素粗提物 取4g辣椒粉末于烧瓶中，再加上40mLCH2Cl2和数粒沸石，套上冷凝管，在回流装置上回流20min，然后冷却。把收集到的粗提物在重力下过滤，滤液装于小烧杯中，蒸去溶剂，得到粗物（编号）。 2. 薄层层析 （1）制备。层析板取2g硅胶，加6mL 1％的CMC-Na，搅匀，将硅胶糊均匀涂布于洗干净的玻片上，晾干。（110℃下干燥2小时） （2）点样。距边缘1.50cm处画一基线，中点为原点，用毛细管吸取样液（粗提物加1mLCH2Cl2溶解）少许，轻触原点，使板上点直径少于3mm。 （3）展层。将薄层板点样端朝下斜靠于层析缸内的支架，垫高层析缸一端注入10mLCH2Cl2于层析缸低处，加盖饱和1min，然后放平层析缸，展层，当溶剂前沿上开距上边缘0.5cm 处，取出薄层板，挥干溶剂。 （4）结果处理。记录每一板上点颜色并计算其Rf ，并推测各板上点为何种化合物。 四、实验步骤 3. 柱层析 （1）装柱。固定好层析柱，加入10mLCH2Cl2。称取15g硅胶加上30mL CH2Cl2一起搅拌均匀，排净气泡，均匀连续注入层析柱中，将CH2Cl2液面恰将至硅胶柱柱面，要求硅胶柱面平整。 （2）加样。用长滴管吸收约0.5mL样液于均匀柱面，将液面降至柱面，再用干净的长滴管吸收约0.5mL的CH2Cl2均匀加于柱面，将液面降至柱面，重复数次至CH2Cl2层不显红色。 （3）洗脱。注入20mL CH2Cl2，控制流速3~4滴/秒，分段收集流出液。 （4）观察处理。观察并记录各色带位置、颜色、大小，推测各色带为何种物质。 五、实验结果与分析 从分离流出液的颜色种类和数量来比较薄层层析和柱层析分离效果的差别。 六、思考题 1. 影响辣椒色素混合物分离效果的因素有哪些？ 2. 柱层析的装柱方法有哪几种？各有什么利弊？ THANKS