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酵母菌种群数量 第1页/共12页 探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化 第2页/共12页 材料用具： 材料：酵母菌贮用培养液，无菌葡萄糖溶液，无菌水。 用具：血细胞计数板，盖玻片，有螺旋盖的试管，滴管，移液管，试管架，记号笔，直尺，坐标纸，显微镜。 第3页/共12页 一、提出问题 在封闭的环境中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？养分会影响酵母菌种群的数量吗？温度会影响酵母菌种群的数量？ 二、作出假设 酵母菌种群的数量随培养时间的延长而呈S型增长，或酵母菌种群的数量随培养时间的延长而呈J型增长等。 第4页/共12页 三、设计实验 （1）制备酵母菌贮用培养液：取洁净的试管若干支平均分成A、B两组， A组为实验组，装培养液10 mL，酵母菌母液0.1mL；B组为对照组，装培养液10 mL，将A、B 组试管置于28℃恒温箱中培养。 （2）定时取样计数：连续7天，在每一天相同时间用血细胞计数板对一定量的酵母菌贮用培养液进行细胞计数。将数据记录在类似以下表格内。 第5页/共12页 计数试管 第一天 第二天 …… 第七天 A0 B0 A1 B1 … … A7 B7 样品1 样品2 总数 平均数 稀释倍数 平均数X稀释倍数 估算数 （3）数据处理，建立数学模型（画坐标曲线） （4）结果分析与讨论 第6页/共12页 四、实验过 程 1.酵母菌贮用培养液制备 材料：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g，大烧杯量取1000 mL蒸馏水，酵母菌母液（由少量活性干酵母溶解于适量35℃温水制成）。 用具： 各容量烧杯，1000 mL水浴锅，试管，量筒，10mL移液管， 1mL移液管，滴管，标签，纱布，牛皮纸，玻璃棒，天平，高压蒸汽灭菌锅，恒温箱等 （1）配制马铃薯葡萄糖培养基：将去皮马铃薯，切成约2cm2的小块，放入盛有1000 mL水的水浴锅煮沸30min，注意用玻棒搅拌以防糊底。30min后，用双层纱布过滤，过滤时用玻棒引流，取其滤液加葡萄糖，再补足水至1000 mL，自然pH。 第7页/共12页 （2）分装：按预先设计将试管分为A、B两组进行分装。每次用10mL移液管吸取10mL培养液到试管（注意不要将培养液沾在试管口和试管上段以免引起污染），待分装完毕，每支试管加塞后把试管扎成捆后，包一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。然后用贴上标签，注明培养基的名称、日期等。取样、计数时所用的移液管、滴管、试管也分别包纸，以备灭菌。 （3）灭菌：用高压蒸汽灭菌100Pa将培养液和取样、计数时所用的移液管、滴管分别灭菌20min。 （4）接种：接种时要点燃酒精灯，在火苗附近制造灭菌环境。再用灭菌干净的1mL移液管每次吸取0.1mL酵母菌母液，往A组每支试管中加入，B组不加。 （5）培养：将A、B两组试管置于 28℃恒温箱中培养。 第8页/共12页 2.配制样品 （1）4－6人组成一个小组，每组做两个样品:分别记为样品1和样品2 （2）配制样品1：用记号笔标记有螺旋盖的试管A0、 B0，在试管A0和B0中分别加入10ml无菌葡萄糖溶液。从恒温培养箱内取出A和B组试管各一支，用1mL移液管移取0.1mL A和B中的贮用培养液，分别加入到试管A0和B0中。 用同样方法配制样品2。 每天取样时间大体一致，每次均从A和B两组中各取一支试管。计数过程中和培养一样，一定要遵守无菌操作规范，取样的移液管要灭菌且分开使用，每次取样前要试管振荡摇匀。 第9页/共12页 3.对试管A0进行细胞计数4.对试管B0重复步骤3，进行细胞计数5.对样品2进行步骤3和步骤4 拧紧A0试管盖将试管倒转数次，使酵母菌细胞分布均匀。用滴管从试管A0中取1滴培养液到血细胞计数板的方格区，盖上盖玻片。在显微镜高倍镜下镜检计数，将所得数据填入记录表。 计数注意事项：(1)大格内细胞的计数顺序为左上→右上→右下→左下4个中格。(2)压在方格线上的细胞只计左线和上线上的细胞数。(3)酵母细胞若有粘连,要数出团块中的每一个细胞。(4)出芽酵母的芽体体积若超过细胞体积的1/2，则算独立个体。(5)计数总数不少于300个细胞。 稀释方法：如记数时发现细胞数较多，不易分辨，吸取的样液应当稀释。方法是：将9 mL无菌水移入1支灭菌过的试管里，然后立即将1mL培养液移入试管里并充分混匀，使原培养液被稀释10倍。再依照步骤2方法进行取样。 第10页/共12页 7.处理数据，建构数学模型 （1）根据所得数据计算两次计数的平均值，用公式估算样品试管内的细胞总数并记录。 （2）在坐标纸上开始绘制种群数量随时间变化曲线和酵母菌细胞数量变化与浑浊度之间的关系曲线。 ①横坐标(X轴)代表时间(第0天~第7天)，纵坐标(Y轴)代表酵母细胞数(105~109).在坐标纸上标记当天试管 A0