高中生物：“题说”微生物计数.docx

“题说”微生物计数 例1 ( 2015?年全国Ⅰ卷理综第?39?题节选)?若要测定培养液中微生物?B?的菌体数，可在显微镜下用???????直接计数;?若要测定其活菌数量，可选用????? ?法进行计数。?例2 (2019?年全国Ⅰ卷理综第?37?题节选)?Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是??????????。?（参考答案:?血细胞计数板 稀释涂布平板法??稀释涂布平板法） 解析：显微镜直接计数法是利用显微镜、血细胞计数板等工具对纯培养悬浮液直接计数来检测样本中的细胞数目。该方法能直观、快速地检测出单细胞状态下的微生物或丝状微生物所产生的孢子的数目，但是不能区分死细胞和活细胞，不适合细胞密度低的样品。 ?释涂布平板法常常需要先将样品进行一系列的稀释，然后吸取适量稀释样品涂布在平板上，在稀释度适宜的情况下一个菌落是由一个活细胞繁殖形成的，从而通过统计平板上的菌落数来推算活菌数。该方法能灵敏地检测出样品中的活菌数，但实验过程手续繁、耗时长、影响因素较多。?显微镜直接计数法由于不能区分死菌和活菌，因此计数结果往往比实际活菌数偏高。为避免把死菌计数在内，可用台盼蓝染色:?被染成蓝色的为死菌，反之为活菌。稀释涂布平板法测定活菌数目的时候，由于相邻两个或多个细胞连在一起，可能形成一个菌落，因此测定值比实际值小。?例3.（2016?年全国Ⅰ卷理综第?37?题节选）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为?36?个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了?6?个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了 现象。若将?30（即36-6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法? ??(?填“正确”或“不正确”)?。（参考答案:?污染 不正确）?设置不接种的空白培养基作为空白对照组，证明培养基制备过程中没有被杂菌污染，增强实验的说服力，保证实验结果的准确性。若该培养基上出现了菌落则说明实验过程出现污染现象，应舍弃数据，查找原因，重做实验。例4.（浙江高考2016年10月）取适量含产脲酶细菌的10-4、10-5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上菌落数最少的是（?）?A.10-5稀释液+尿素固体培养基??B.10-5稀释液+LB固体培养基C.10-4稀释液+尿素固体培养基??D.10-4稀释液+LB固体培养基解析：在相同稀释度下，选择培养基上允许能分解尿素的菌类(?还可能有土壤中的自生固氮菌)?存活，而牛肉膏蛋白胨培养基上允许土壤中几乎所有菌类都能生存，因此若牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数比选择培养基的菌落数多，则说明该培养基有选择作用。答案：A例5、( 2018 年全国Ⅰ卷理综第?37?题节选)?甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果:甲同学涂 布 了?3?个 平 板，统 计 的 菌 落 数 分 别 是110、140?和?149，取平均值?133。乙同学涂布了?3?个平板，统计的菌落数分别是?27、?169?和?176，取平均值?124．有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是:? ? ??。?（参考答案: 正确稀释后涂布平板，平板上的菌落数为?30～?300?之间，乙同学的结果中三个平板的菌落数有一个只有?27）。解析：在采用稀释涂布平板法进行计数时，必须设置 3个稀释度并且成梯度，每个稀释度重复?3?次以上，取平均值，避免结果的偶然性，使结果更加准确可靠。?若上述乙同学的结果中三个平板的菌落数分别是30、169?和?176，能取三者的平均值作为实验结果吗?对于数据的变异程度，最重要的度量方法是标准差。参照平板菌落数的允许差值如表1。 三个平板的菌落数分别是?30、169?和?176，平板菌落平均数?125?处于101～?300?之间，标准差所允许差值为±≤?50，运用标准差公式计数，上述例题标准差为?82，已经超出允许范围。因此，同一稀释度的?3?次重复菌落数处于?30?～?300?的范围内时，若数据相差较大，超过允许的差值，也应舍弃。舍弃数值?30?后不足三个平板，也不能用菌落数为?169?和?176?这两个平板的平均值来推算样品中的活菌数，而应找出原因并重新实验。（资料来源：钟佩英.广东省佛山市三水区实验中学.例析菌落数目统计的几个常见问题.生物学教学 2020年第5期）