高中生物：“CRISPRCas9”简介及高中题目应用.docx

上帝的剪刀“CRISPR/Cas9”简介及高中题目应用 10月7日，2020年诺贝尔奖的最后一个自然科学奖项——化学奖被揭晓，埃马纽埃尔·卡彭蒂耶（Emmanuelle Charpentier）和詹妮弗·杜德纳（Jennifer Anne Doudna）获得了这一奖项，获奖原因是开发了一种基因组编辑的方法。? 有些遗憾的是，对CRISPR-Cas9的发展和应用做出贡献的华裔科学家张锋不在获奖名单中。1CRISPR/Cas9技术CRISPR/Cas9是继“锌指核酸内切酶（ZFN）”、“类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）”之后出现的第三代“基因组定点编辑技术”。所谓“基因编辑技术”，就是能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入的一项技术。 与前两代技术相比，CRISPR/Cas9具有成本低、制作简便、快捷高效的优点，于是它迅速风靡于世界各地的实验室，成为科研、医疗等领域的有效工具。 ? CRISPR/Cas9被称作“基因魔剪”（图片来源：诺贝尔奖官方网站） CRISPR/ Cas9 （Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最近几年兴起用于靶向基因特定DNA修饰的重要工具。CRISPR是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。细菌在CRISPR和Cas9的帮助下，可以经由小RNA分子的引导，靶标和沉默入侵者遗传信息的关键部分。在该系统，crRNA（CRISPR-derived RNA）与tracrRNA（trans-activating RNA）结合形成的复合物能特异性识别靶基因序列，并引导Cas9核酸内切酶在靶定位点剪切双链DNA，随后，细胞的非同源末端连接修复机制（NHEJ）重新连接断裂处的基因组DNA，并引入插入或缺失突变。我们也可以提供一个外源双链供体DNA片段（Donor）通过同源重组（HR）整合进断裂处的基因组。从而达到对基因组DNA进行修饰的目的。目前，CRISPR-Cas9系统的高效基因组编辑功能已被应用于多种模式生物，包括人、小鼠、大鼠、斑马鱼、秀丽隐杆线虫、植物及细菌。 原理示意图： ? 某已知的由单碱基突变造成的疾病中，大约有一半与 G·C 碱基对突变为 A·T 碱基对有关。戴维·刘及其研究团队所发明的碱基编辑器能够恢复这类突变，从而可能治疗该类疾病，这就是该研究成果的重要意义所在。此外，这种碱基编辑器对细菌细胞和人类细胞的 DNA 都能生效，相比以前只应用于细菌细胞的方法适用范围更广。它引入预期突变的效率约为 50%，相比其他基因组编辑方法效率更高，而且几乎不会产生副作用。 而以张峰为核心的科研团队在《科学》杂志上发表了他们的重大研究成果，他们首次成功将 CRISPR/Cas9 技术应用于 RNA 编辑, 这项技术使得 CRISPR 系统能够以 RNA 为靶向目标，而不再限于编辑 DNA。关于如何使用该技术编辑 RNA，有一个比较形象而且比较通俗易懂的类比：“从众多的基因中寻找出病变基因就像在一本厚厚的书寻找一个错别字。在 word 文档中可以在搜索框中输入想要找的句子。然后在光标所指的地方就是需要做出修改的地方。在大脑中，Cas9 类似那个搜索功能。在这个前提下，把含有特定位置信息的 RNA 输入到搜索框，而 Cas9 就会带着 RNA 信息进入基因组并找到相应的位置，此后 Cas9 就会在相应的地方把基因组剪开，而 RNA 此时可以拼接上去。”编辑 RNA 和编辑 DNA 所产生的结果有一个重大的差别：DNA 编辑会使细胞的基因组发生永久性的变化，但是张峰使用的基于 C2c2 的 RNA 编辑技术可能允许科学家让细胞基因组根据需要进行上下调节的临时变化。张峰实验室的研究生奥玛尔·阿布达耶说：“C2c2 对我们的影响巨大，很有可能改变我们对 RNA 在疾病和细胞功能中所起作用的认知。”张峰也表示这种编辑 RNA 的新能力为治疗许多疾病提供了更多潜在的机会。 这两项重大的研究成果承载了许多价值或意义，但也存在一些有待改进的地方。对此，戴维·刘说：“我们正在努力使碱基编辑技术能够运用到治疗领域。”此外，他承认仍然存在许多安全和执行方面的问题。英国弗朗西斯·克里克研究所的罗宾·巴奇教授认为，这种碱基编辑器 50% 的效率让人很兴奋，但仍有待提高，以后还需要更多的研究来验证该方法的安全性。 尽管基因编辑技术可能带来各种治疗疾病的新可能，但是它所涉及的伦理问题却不容忽视。基因编辑所引发的问题主要有两种类型：基础研究引发的伦理问题、技术应用引发的伦理问题。目前，基因编辑技术的发展远未成熟，但对于其所可能引发的问题的争论已经开始。 2015 年 4 月，中山大学黄军就教