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肺出血新生大鼠肺组织农药组分分析 新生儿肺出血的原因有很多，比如缺氧、感染、低体温和严重的肺血管堵塞。发病机制尚未完全阐明 1 材料和方法 1.1 实验动物及分组 出生3~5 d、SPF级Wistar大鼠40只, 体重5~10 g, 雌雄不限, 由湖北省动物实验中心提供, 编号后随机分为4组, 即实验1组、2组、3组及正常对照组, 每组10只。 1.2 改性和光度计及红外辐射制作 0.1%肾上腺素注射液由福州海王制药有限公司生产 (批号041022) , 组胺水平测试用日立牌F-2500荧光分光光度计, 复温使用宁波戴维医疗器械有限公司生产的红外线辐射保暖台。 1.3 次注射肾上腺素液 (1) 实验1组、2组、3组大鼠背部皮下注射0.1%肾上腺素0.5 ml/kg后立即放入4℃冷室。1组大鼠1 h后断头处死;2组大鼠4 h后断头处死;3组大鼠4 h取出后放保暖台上复温, 腹壁温度升至32℃后放25℃~28℃室温中。出冷室后复温的同时立即注射肾上腺素1次, 剂量不变, 间隔1 h再注射1次, 剂量加倍, 出冷室后2 h断头处死。对照组放25℃~28℃室温中, 断头处死。 (2) 处死大鼠取出肺脏后肉眼观察肺组织大体病理情况, 按文献方法将其分为5级:Ⅰ级正常肺, Ⅱ级肺水肿, Ⅲ级点状肺出血, Ⅳ级局灶性肺出血, Ⅴ级弥漫性肺出血 1.4 统计分析 肺脏大体病理变化差异采用RIDIT分析;组胺水平变化采用多组计量资料比较的秩和检验。 2 结果 2.1 肢体皮肤温度 实验1组大鼠1 h从冷室中拿出, 腹部皮肤温度 (22±1.5) ℃;2组、3组4 h从冷室中拿出, 腹部皮肤温度 (17.5±1.3) ℃;3组处死前腹部皮肤温度 (29.2±1.6) ℃, 正常对照组大鼠腹部皮肤温度 (30.1±2.1) ℃。 2.2 两组大鼠肺出血比较 实验1组、2组、3组大鼠发生不同程度肺出血 (图1) , 对照组大鼠无肺出血 (表1) , 组间差异RIDIT分析, 差异有高度统计学意义 (χ 2.3 肺出血区域出血 Ⅲ级肺出血见散在灶性出血;Ⅳ级肺出血见灶性出血, 偶见融合性出血;Ⅴ级肺出血见多处小叶融合性出血, 出血区域肺泡腔内充满红细胞 (图2) 。电镜Ⅴ级肺出血见肺泡腔内有出血、渗出, 部分气血屏障结构模糊, 肺泡Ⅱ型细胞活性物质减少, 内皮细胞、Ⅰ型上皮细胞无明显肿胀 (图3) 。 2.4 组鞣剂水平与实验2组及对照组比较 实验组与对照组肺组织组胺水平变化见表2。实验3组组胺水平与实验1组、2组及对照组比较有明显升高 (P0.05) , 差异有统计学意义, 其他组间比较差异无统计学意义。 3 完善细胞内皮细胞间的作用机制 新生儿肺出血主要由肺血管通透性增加所致, 而不是由于血管的直接损伤。早在1973年Coll就分析了肺出血的渗出液, 其中红细胞数比血液中少, 其他成分与血浆相仿, 说明肺出血主要由肺血管通透性增加引起 组胺是一种生物活性物质, 在生物体内分布广泛, 在肺组织内含量丰富, 肺内肥大细胞、巨噬细胞、血管内皮细胞及血液中的血小板、中性粒细胞等均可合成组胺 正常情况下, 内皮细胞间由咬合蛋白、带状闭合蛋白等形成紧密联结, 由钙黏蛋白等形成黏附联接, 由整合蛋白形成内皮-基底膜黏附联接, 从而形成细胞外屏障;以上蛋白的细胞内区段通过不同方式与细胞内被称为细胞骨架的肌动蛋白、肌球蛋白相连, 使细胞骨架与细胞外基质之间互相沟通, 形成一个整体。细胞骨架的活动和这些蛋白本身的降解破坏, 都可能带来屏障机制的紊乱和血管通透性增高。 组胺使肌球蛋白轻链磷酸化, 从而活化肌球蛋白重链头部的ATP酶, 产生的能量能使细胞骨架肌动蛋白微丝滑动, 细胞发生收缩, 引起连接蛋白的结构和功能失调, 组胺还引起钙黏蛋白和连环蛋白的磷酸化, 从而使钙黏蛋白、连环蛋白和骨架蛋白的结合数目减少, 降低了细胞间黏附的强度, 导致了细胞间裂隙的形成。内皮细胞收缩还同时带来胞浆变薄, 从而促进胞内穿细胞通道的形成 本实验显示, 在肺出血形成发展过程中, 肺组织组胺含量有明显升高, 说明组胺升高与肺出血的发生可能具有密切相关性。提示使用抗组胺药物可能是预防和治疗肺出血的一种措施。