铜绿假单胞菌的分离鉴定及耐药性检测.docxVIP

铜绿假单胞菌的分离鉴定及耐药性检测 铜绿假单胞菌（pa）是医院常见的感染条件。它对医学源性感染的检测率正在提高。我院老年病区长期住院患者下呼吸道标本中检出率达71.36%, 耐药性较强, 且对某些抗菌药物 (尤其是三、四代头孢类抗菌药物) 耐药性时有变化 1 1.1 下呼吸道标本 临床菌株: 96株Pa菌系2005-03月～2006-01月来自于我院老年病区长期住院患者的下呼吸道标本:主要是痰、气管切开患者的呼吸道分泌物和咽拭子等。质控菌株:铜绿假单胞菌ATCC27853和大肠埃希菌ATCC25922均购于卫生部临床检验中心。 1.2 生物仪器及试剂 MicroScan WalkAway40 全自动微生物分析仪, 美国 DADE BEHRING 产品;M-H培养基及有关试剂为杭州天和生物技术有限公司产品;药敏纸片为北京天坛药物生物技术开发公司产品。 1.3 微生物分析方法 标本接种于血平板和麦康凯平板, 挑取可疑菌落进行纯培养, 采用MicroScan WalkAway40 全自动微生物分析仪鉴定至种。K-B法对分离的Pa菌做5种临床常用的 三、四代头孢类抗菌药物的体外敏感试验, 结果判断根据美国临床试验标准化委员会 (NCCLS) 2004文件资料判定 1.4 内酰胺酶、金属酶、esbls和阐明酶 采用水解Nitrocefin法 2 2.1 -基乙醇抑制药料 96株Pa菌检测到产β-内酰胺酶菌株31株, 占所有分离Pa菌的32.29%, 其中产金属酶Pa菌 (可被2-巯基乙醇抑制) 一株, 占1.04%。这些菌对FEP、CAZ、CFP、CTX和CRO的耐药率分别为20.03%、32.29%、52.83%、54.17%、62.50%.;产β-内酰胺酶的Pa菌 (31株) 与非产酶的Pa菌 (65株) 对5种抗菌药物耐药性的比较见表1。 2.2 esbls菌株 从31株产β-内酰胺酶的Pa菌中检测到有9株头孢他啶或头孢噻肟加克拉维酸 (CA) 比不加克拉维酸的抑菌圈直径≥5mm者, 可确认为产ESBLs菌株, 占所有分离出Pa菌的9.37%。同时, 检测到3株高产 AmpC酶者, 占所有分离出Pa菌的3.12%。 3 pa菌对多种抗菌药物的耐药 近年来, 由铜绿假单胞菌引起的医源性感染逐年增加, 我院老年病区长期住院患者下呼吸道标本中检出率达71.36%, 该菌对第三、四代头孢类抗菌药物的耐药性越来越强, 本研究中对FEP、CAZ、CFP、CTX、CRO的耐药率分别为20.03%、32.29%、52.83%、54.17%、62.50%, 较马越等 Pa菌耐药机制较复杂, 一般认为:抗生素渗透障碍, 产生灭活酶 (β-内酰胺酶) , 作用靶位改变, 主动外排机制及形成生物膜等是其产生多重耐药的主要机制。该菌可以产生几乎所有类型的β-内酰胺酶, 其中染色体介导的AmpC酶是其对多种头孢菌素、单环类、头霉素甚至碳青酶烯类 (如亚胺培南) 抗菌药物多重耐药的重要原因。本研究表明:老年病区长期住院患者分离的铜绿假单胞菌有32.29%产β-内酰胺酶, 而且, 产ESBLs、产 AmpC酶及产金属酶株均有检出, 这从很重要的方面解释了这些临床株多重耐药、临床治疗效果不佳的原因。由于AmpC酶是诱导酶, 当有诱导作用的β-内酰胺类抗菌药物存在时AmpC酶产量明显增加, 碳青酶烯类抗菌药物是很强的诱导剂, 酶抑制剂克拉维酸对 Pa菌产 AmpC酶也有很强的诱导作用 本研究中Pa菌对头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松有较高的耐药率, 只有头孢他啶还保持较高的抗菌活性, 可能与其慢渗作用有关, 第四代头孢类抗菌药物 (头孢吡肟) 强于第三代, 可能与其能快速通过细菌的外膜屏障与青霉素结合蛋白结合、与β-内酰胺酶的亲和力较低, 而且还可以抑制产生质粒介导的AmpC酶有关。药敏结果比较表明, 产β-内酰胺酶的Pa菌与非产酶的Pa菌对临床常用的5种三、四代头孢类抗菌药物耐药率相差显著, 提示β-内酰胺酶的产生与否是Pa菌对某些抗菌药物 (尤其是三、四代头孢类抗菌药物) 耐药性变化的重要因素, 同时也提醒临床医生要合理选用抗菌药物, 尽量减少诱导因素, 避免多重耐药株的产生。