不同佐剂制备的鸡坦布苏病毒灭活疫苗免疫效果比较.docxVIP

? ? 不同佐剂制备的鸡坦布苏病毒灭活疫苗免疫效果比较 ? ? 刘宇卓，李嘉萍，李 银，黄欣梅，赵冬敏，韩凯凯，杨 婧，刘青涛，毕可然 (江苏省农业科学院 兽医研究所/农业部 动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏 南京210014) ? 不同佐剂制备的鸡坦布苏病毒灭活疫苗免疫效果比较 刘宇卓，李嘉萍，李 银，黄欣梅，赵冬敏，韩凯凯，杨 婧，刘青涛，毕可然 (江苏省农业科学院 兽医研究所/农业部 动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏 南京210014) 以不同材料为佐剂制备坦布苏病毒灭活疫苗，用ELISA方法检测免疫鸡不同时间抗体产生的情况，以选择最佳制苗佐剂。取40只1月龄SPF鸡，随机分成8组，以不同的佐剂组合制备疫苗，免疫7个组(包括白油组、白油+IL-2组、铝胶组、铝胶+IL-2组、蜂胶组、蜂胶+IL-2组、IL-2组)，另设不免疫对照1个组，分别于免疫前及免疫后1周、2周、3周和4周采血，用已建立的ELISA方法检测血清中的ELISA抗体，比较不同佐剂灭活疫苗的免疫效果。结果表明：以白油+IL-2作为佐剂组的灭活疫苗效果最好，产生的抗体水平优于其他各组，免疫后3周ELISA抗体可达到1∶800以上，是较理想的制备坦布苏病毒灭活疫苗的佐剂。 佐剂；坦布苏病毒；灭活疫苗；免疫效果 2010年4月，我国多地相继暴发了一种由黄病毒科(Flaviviridae)、黄病毒属(Flavivirus)的坦布苏病毒(Tembusu virus，TMUV)感染种鸭、种鹅、蛋鸭、蛋鹅的事件，其是以产蛋骤然大幅下降，甚至停产为主要临床特征，并伴有食欲急剧减退、高热、运动障碍，排绿色粪便的急性传染病[1-4]。肉鸭、肉鹅均可感染，之后陆续有研究报道，鸡也可感染此病毒而发病，临床症状及表现与鸭、鹅相似[5-8]。目前学者在 TMUV 研究领域取得了重要进展，国内外研究者针对病毒分离、鉴定及生物学特性做了大量研究工作[9-12]。已有研究证明鸭坦布苏病毒能够有效诱导抗体和细胞免疫反应，也有针对鸭的疫苗在研发中，但针对鸡的TMUV灭活疫苗研发及其佐剂方面的研究较少。 疫苗佐剂是能够非特异性地改变或增强机体对抗原特异性免疫应答、发挥辅助作用的一类物质。本研究通过比较白油、铝胶、蜂胶、白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2)作为佐剂单独使用及联合使用后，对TMUV灭活疫苗免疫鸡后产生抗体的影响，以期能筛选出免疫效果佳、用于鸡的坦布苏病毒灭活疫苗的佐剂。 1　材料与方法 1.1病毒株 坦布苏JS804株，由江苏省农业科学院兽医所禽病实验室分离、鉴定、保存。 1.2实验动物 本研究室饲养1月龄SPF鸡。 1.3主要试剂 白油、铝胶均由本研究室保存；IL-2由南京农业大学动物医学院寄生虫实验组提供；蜂胶购自老山药业股份有限公司；酶标二抗为HRP标记的兔抗鸡IgY，购自美国EARTH公司；BSA、TMBS均购自BIOSHARP公司。鸡坦布苏病毒ELISA抗体检测试剂盒，由本研究室制备并保存。 1.4主要仪器 立式压力蒸汽灭菌器(SY-450)购自徐州圣业医疗器械有限责任公司；精密电子天平(AA200)购自美国丹佛仪器公司(Denver Instrument)；二级生物安全柜购自西班牙Telsta BioIIA公司；优普超纯水制造系统购自南京优普实验仪器有限公司；高速冷冻离心机购自德国艾本德公司(Eppendorf)；低温冰箱购自海尔公司；电热恒温培养箱(DNP-9162A)购自上海光都仪器设备有限公司；酶标仪(ELx800)购自美国伯腾仪器有限公司(Biotek)。 1.5抗原制备 取TMUV细胞毒，向200 mL TMUV细胞毒中加入0.6 mL的甲醛，充分混匀，37 ℃灭活24 h。 1.6不同佐剂灭活疫苗的制备 1.6.1白油佐剂取47 mL白油与3 mL司本-80混合，高温灭菌，即为油相；取灭活后的TMUV 25 mL，加入1.5 mL吐温-80混匀，即为水相；将油相用乳化仪低速搅拌，加入水相，高速搅拌1 min，即制成1号苗。 1.6.2白油+IL-2佐剂取灭活后的TMUV 5 mL，加入1 mL浓度为4 mg/mL的IL-2、 0.3 mL吐温-80，混匀，即为水相；将油相用乳化仪低速搅拌，加入水相，搅拌1 min，即制成2号苗。 1.6.3铝胶佐剂取7.5 g铝胶，加入50 mL PBS，充分溶解，用乳化仪低速搅拌，溶解后的铝胶与灭活后的TMUV以2∶1的体积比混合，搅拌1 min，即制成3号苗。 1.6.4铝胶+IL-2佐剂取10 mL溶解后的铝胶溶液，用乳化仪低速搅拌，加入灭活后的TMUV 5 mL和1 mL IL-2,搅拌1 min，即制成4号苗。