不同产地佩兰UPLC指纹图谱研究.docxVIP

? ? 不同产地佩兰UPLC指纹图谱研究 ? ? 李素梅，罗思妮，毕晓黎，胥爱丽，李养学，肖观林，陈伟韬 [1.广东省第二中医院（广东省中医药工程技术研究院）/广东省中医药研究开发重点实验室，广东 广州 510095；2.佛山市中医院，广东 佛山 528000] 佩兰来源于菊科植物佩兰EupatoriumfortuneiTurcz.的干燥地上部分，具有芳香化湿、醒脾开胃、发表解暑的功效，用于治疗湿浊中阻、口中甜腻、口臭、暑湿表证、湿温初起等[1]，为常用化湿、醒脾、解表中药，用药历史悠久，在我国华南、西南、中南、华东、陕西、河北、山东及湖北等地均有分布[2]。佩兰主要含挥发油类[3-4]、黄酮类[5-7]、生物碱类[8-9]、脑苷脂类、蒲公英甾醇、蒲公英甾醇乙酸酯等成分[10]。药理研究表明，佩兰具有抗炎[11]、祛痰[12]、抗肿瘤[13]、抑菌[14-16]、增强免疫力[17-18]等作用。 目前，关于佩兰质量控制方面的研究报道较少，且主要集中在挥发油[19-21]分析和化学成分提取分析研究等方面[10]，均未涉及到佩兰药材的超高效液相色谱指纹图谱研究。2020年版《中国药典》收载的佩兰质量控制项目主要是定性鉴别和总挥发油含量，缺少具体的指标性成分要求。为了更全面地评价、控制佩兰的质量，本研究收集了6个不同产地的佩兰，采用UPLC技术建立了佩兰指纹图谱，旨在为佩兰的质量控制提供参考。 1 仪器与试药 1.1 仪器 TLE-204分析天平、XS205DU型分析天平（瑞士-梅特勒托利多仪器公司）；JJ500电子天平（常熟-双杰测试仪器厂）；KQ700DE超声清洗器（昆山超声仪器公司）；安捷伦1290超高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）。 1.2 试药 香豆素对照品（批号：X-013-150801，纯度：98%），购自成都瑞芬思生物科技有限公司；24批佩兰药材经广东省中医药工程技术研究院刘法锦教授鉴定为菊科植物佩兰EupatoriumfortuneiTurcz的干燥地上部分，产地信息见表1；液相用甲醇为Merck色谱纯试剂，液相用水为屈臣氏水，甲醇、磷酸等其他试剂为分析纯。 表1 佩兰样品信息Table 1 Information of the E.fortunei 2 方法与结果 2.1 色谱条件 以 Waters Cortecs UPLC T3（2.1 mm×150 mm，1.6μm）为色谱柱，以甲醇为流动相A，0.1%磷酸水溶液为流动相 B，梯度洗脱（0～40 min，5%～100%A）；流速为0.25 mL/min；检测波长为230 nm；柱温为35℃；进样量为2μL。 2.2 供试品溶液的制备 取佩兰粉末（过三号筛）约0.5 g，精密称定质量，置锥形瓶中，精密加入70%（体积分数，下同）甲醇溶液10 mL，超声处理（功率700 W，频率45 kHz）提取20 min，取出，放冷，用70%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，提取液通过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得。 2.3 对照品溶液的配制 精密称取香豆素对照品5.36 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度为0.210 1 mg/mL的对照品溶液，从中精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度为21.01μg/mL的对照品溶液，备用。 2.4 方法学考察 2.4.1 专属性试验 精密吸取70%甲醇溶液2μL进样，按“2.1”项下的色谱条件测定，结果见图1，专属性试验结果表明，该分析方法能正确检测所指认的共有峰，不受提取溶剂的干扰。 图1 专属性试验UPLC图Figure 1 The UPLC of specific test 2.4.2 精密度试验 取S1供试品溶液，按“2.1”项色谱条件连续进样6针，以5号峰（香豆素）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积，其中各共有峰相对保留时间的RSD在0.06%～0.12%之间，相对峰面积RSD在1.22%～2.33%之间，表明仪器精密度良好。 2.4.3 重复性试验 取佩兰S1样品，按“2.2”项方法平行处理6份供试品溶液，再按“2.1”项色谱条件进样分析，以5号峰（香豆素）为参照峰，计算各共有峰的相对峰面积RSD在1.42%～4.75%之间，表明方法重复性良好。 2.4.4 稳定性试验 取佩兰S1供试品溶液，按“2.1”项色谱条件，分别在0、2、4、7、9、11、13、15、17 h分别进样分析，以5号峰（香豆素）为参照峰，计算各共有峰的相对峰面积RSD在0.71%～1.92%之间，表明佩兰供试品溶液在17 h内稳定性良好。 2.5 佩兰对照指纹图谱的建立及相似度评价 取24批佩兰样品，按“2.2”项方法分别制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱