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烟嘧磺隆安全性检测 磺酰胺是20世纪80年代开发的一种新型杂草。具有高度的杂草活性、少量的草、广泛的杀草谱和长期的长期疗效等特点。这是消毒超标时代的象征，对消毒发展史具有里程碑意义。烟嘧磺隆 (nicosulfuron) 是磺酰脲类除草剂商品化品种之一, 是一种高效、低毒玉米田苗后专用一次性除草剂, 具有用量低、杀草谱广、除草效果好等特点, 并对野高梁、野黍子有特效, 为了保证其安全使用, 我们从遗传毒理学方面进行了鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验 (Ames试验) 、小鼠骨髓多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验、V79细胞基因突变试验, 探讨其有无致突变作用。 1 1.1 实验动物和动物 烟嘧磺隆原药 (国内某单位提供) , 纯度95%;2, 4, 7-三硝基-9-芴酮 (Fluka公司) ;MMS (Merck公司) ;二羟基蒽醌和2-AF (上海试剂厂) ;培养基和胰酶 (Gibco公司) ;环磷酰胺 (上海华联制药有限公司) ;丝裂霉素C、氧化型辅酶Ⅱ、6-磷酸葡萄糖钠盐、6-巯基鸟嘌呤 (6-TG) 、胸苷、次黄嘌呤、氨甲喋呤、甘氨酸 (Sigma公司) 。 鼠伤寒沙门氏菌株TA97、TA98、TA100、TA102, 由美国Ames实验室提供, 经特性鉴定符合要求;肝微粒体酶S9 (多氯联苯诱导) 本实验室按Ames方法制备。三级昆明种小鼠, 购自中国药品生物制品检定所实验动物中心[京动许字 (2000) 第017号]。中国仓鼠肺细胞株 (V79细胞) , 本实验室液氮保存。 1.2 制备阳性对照和回变性对照 采用平板掺入法, 剂量为8、4、2μg/皿, 同时设自发回变、溶剂对照 (无菌蒸馏水) 和阳性对照。在加和不加S9条件下分别进行试验。 1.3 h经口染毒试验 昆明种小鼠体重25~30g, 每组10只动物 (雌雄各半) 。间隔24h经口染毒两次, 剂量为1000、500、250mg/kg bw。于第二次给药后6h取胸骨骨髓常规制片, Giemsa染色, 每只动物观察1000个多染红细胞 (PCE) , 并计数含有微核细胞数。 1.4 小鼠睾丸常规片 昆明种雄性小鼠体重25~30g, 每组5只动物。连续5d经口染毒, 剂量为2500、1250、625mg/kg bw。于第一次给药后第14d处死动物, 取出两侧睾丸常规制片, Giemsa染色。每只动物每侧睾丸观察50个中期分裂精母细胞, 记录染色体畸变细胞数和畸变类型并计算畸变率。 1.5 小鼠血清中型mds-pcr检测细胞集落形成率 根据细胞毒性测定试验确定5个测试剂量, 依次为:5000、2500、1250、625、312.5μg/ml。细胞于含THMG的MEM培养液中培养一周 (以杀灭自发HGPRT座位突变体) 后, 接种于无血清MEM培养液中, 在加和不加S9条件下与受检样品接触5h, 置含10%小牛血清的MEM培养液中培养, 进行集落形成率测定和突变体的选择。集落形成率测定:表达结束的细胞, 以400个细胞/瓶密度接种, 每剂量组5瓶细胞, 培养7d后, 用甲醇固定、姬姆萨染色, 计数各瓶的细胞集落数并计算集落形成率 (CFE) 。表达和突变体的选择:表达结束的细胞, 按2.5×10 2 2.1 回变菌落数测定 烟嘧磺隆原药在加与不加S9时, 诱发鼠伤寒沙门氏菌株回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍;各剂量组回变菌落数与溶剂对照比较无显著性差异 (P0.05) , 各剂量组间无明显的剂量-反应关系 (见表1) 。 2.2 组溶剂对照比较 烟嘧磺隆原药各剂量组的微核细胞率为3.2‰~5.2‰, 与溶剂对照比较无显著性差异 (P0.05) ;阳性对照与溶剂对照比较有显著性差异 (P0.01, 见表2) 。 2.3 两组阳性对照和不阳性对照的比较见表1 烟嘧磺隆原药各剂量组的染色体畸变率为0.8%~1.0%, 与溶剂对照比较无显著性差异 (P0.05) , 阳性对照与溶剂对照比较有显著性差异 (P0.01, 见表3) 。 2.4 试验结果的选择 各试验剂量组的突变频率为24.77/10 每种体外短期检测系统均会受到实验条件 (如有限的体外代谢活化系统) 、实验设计、不同受试农药的特殊性等因素影响, 使试验结果存在一定比例的假阴性或假阳性的可能, 任何一项遗传毒性试验中的阳性/阴性结果不能完全说明受试农药对人体具有/无突变性, 需结合遗传毒性方面的多项检测试验结果全面考虑, 以提高对农药是否具有诱变性及潜在致癌性评价的可靠性。因此, 我们选择Ames试验、小鼠骨髓多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验3个测试系统来研究烟嘧磺隆的致突变性。考虑在Ames试验中, 烟嘧磺隆原药对菌株无明显抑菌作用的最大剂量较低, 为保证评价结果的相对可