SN_T 2206.14-2017化妆品微生物检验方法 第14部分：腐生葡萄球菌.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2206.14—2017化妆品微生物检验方法第14部分：腐生葡萄球菌Determination of microbiologies in cosmetics-Part 14 : Staphylococcus saprophyticus2017-05-12 发布2017-12-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局刮涂层查嘉伪 SN/T 2206.14--2017前言SN/T2206《化妆品微生物检验方法》分为14个部分：第1部分：沙门氏菌；第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌；第3部分：肺炎克雷伯氏菌；第4部分：链球菌；~第5部分：肠球菌;第6部分：破伤风梭菌；第7部分:蛋白免疫印迹法检测疯牛病病原;第8部分：白色念珠菌；-第9部分：胆汁酸耐受革兰氏阴性杆菌；-第10部分：金黄色葡萄球菌PCR法;第11部分：金黄色葡萄球菌多重实时荧光PCR法；-第12部分：绿脓杆菌PCR法；第13部分：嗜麦芽窄食单胞菌；第14部分：腐生葡萄球菌。本部分为SN/T2206的第14部分。本部分按照GB/T1.1---2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本部分主要起草人：石建华、王毅谦、李晓虹、鞠慧萍、祝长青、邵景东、蒋原。 SN/T 2206.14—2017化妆品微生物检验方法第14部分：腐生葡萄球菌1范围SN/T2206的本部分规定了化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测方法。本部分适用于化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T7918.1化妆品微生物标准检验方法总则SN/T 1193基因检验实验室技术要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1腐生葡萄球菌Staph.saparophytics葡萄球菌属的一种,革兰氏阳性，血琼脂上呈橙色或灰白色,无溶血，血浆凝固酶阴性,尿素酶阳性，发酵葡萄糖、麦芽糖、蕈糖、松二糖,不发酵乳糖和甘露糖。4试剂和材料4.1试剂除另有规定的外，试剂为分析纯或生化试剂，水为灭菌双蒸水，符合GB/T 6682中一级水的规格。5%生理盐水。4.1.2SCDLP液体培养基（见附录 A的 A.1）。4.1.3血琼脂平板（见A.2）。4.1.4腐生葡萄球菌定位显色培养基（见A.3)4.1.5胰蛋白陈大豆琼脂培养基（TSA）（见 A.4）。4.1.6生化反应试剂。4.1.7VITEK全自动微生物鉴定系统GP测试卡。注：VITEK、GP测试卡是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，也可使用等效产品。4.1.8Taq DNA 聚合酶。4.1.9dNTP:dATP,dTTP,dCTP,dGTP。4.1.10DNA提取试剂：称取0.1g chelex100粉末，加人100 mL灭菌蒸馏水中，摇匀即可。1 SN/T 2206.14--20174.1.11 10× PCR缓冲液:200 mmol/L Tris-HCl(pH 8.4),200 mmol/L 氯化钾(KCl),15 mmol/L 氯化镁（MgCl2）。4.1.12引物和探针：上游引物:5-TGAAGCTGTTTTTGGTAGCGA-3’下游引物:5’-AGTTCCTGGTTTAGCACCTTCA-3TaqMan 探针:5-TCGCAAAGATGTTGCTTGTCACACA-3探针5端由FAM标记，3端由TAMRA标记。4.2材料4.2.1刻度吸管:2.0mL和10.0 mL，分刻度0.1 mL。4.2.2三角瓶:150 mL,250 mL。4.2.3培养皿:90 mm。4.2.4普通光学显微镜(1000×)及载玻片。 mL离心管。仪器和设备55.1天平：感量0.1 g。5.2均质器：转速1000r/min以上。5.3恒温培养箱：36℃±1℃。5.4恒温水浴锅。5.5VITEK全自动微生物鉴定系统或类似设备5.6实时荧光PCR仪。5.7离心机：最大转速13000r/min以上。5.8微量移液器:10 μL,100 μL,200 μL,1 000 μL。5.9低温冰箱：20℃～4℃。6检验程序化妆品中腐生葡萄球菌检验方法是通过增菌、分离纯化、生化鉴定或增菌后进行实时荧光PCR检测，对化妆品中可能存在的腐生葡萄球菌进行定性检验。具体检验程序见图1。一信息是为了方便本部分的使用者，并不表示1）