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扩张型心肌病的发病机制及治疗 扩张性心肌病（tcm）是核电站心肌病，其主要特征是心脏收缩障碍和左心室扩张。发病率高，患者可能心力衰竭。 微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性单链小RNA并可通过调控靶基因表达进而调节基因转录后表达,研究显示miRNA可调控T淋巴细胞发育及分化等过程 1 材料和方法 材料表面 共同语言患者的一般数据 收集2015年3月至2016年4月本院收治的45例DCM患者为研究对象,作为DCM组,所有患者均符合WHO原发性扩张性心肌病诊断标准 试剂和检测试剂 人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat T购自武汉华连科生物技术有限公司。RPMI1640培养基、胰酶购自杭州仟诺生科技有限公司;双荧光报告检测系统购自美国Promega 公司;双荧光报告检测试剂盒购自北京白奥莱博科技有限公司;胎牛血清购自美国Gibco公司;anti-CD3、anti-CD28、anti-CD4-FITC抗体、anti-CD25-PE抗体、anti-CD69-PE-Cy7抗体购自美国Biolegend公司;白细胞介素-2(IL-2)酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒购自美国BD Bio-sciences公司;MTT检测试剂盒购自武汉艾美捷科技有限公司;Lipofectamine2000转染试剂购自美国Invitrogen公司;miR-33b mimic、miR-33b抑制剂(anti-miRNA)及其阴性对照购自上海吉玛基因制药技术有限公司;Myc siRNA及其阴性对照质粒购自广州锐博生物科技有限公司;Trizol试剂与SYBR Green qPCR试剂盒购自日本TaKaRa公司;M-MLV Reverse Transcription Kit试剂盒购自美国Invitrogen公司;兔抗人Myc多克隆抗体、兔抗GAPDH多克隆抗体购自美国Abcam公司;辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG购自中山金桥生物技术有限公司;Western blot所需试剂购自上海西宝生物科技股份有限公司;淋巴细胞分离液购自美国MP Biomedicals公司;红细胞裂解液购自美国eBioscience公司。 方法 分离人外周血细胞,制备pbmcs细胞 采用肝素钠抗凝试管收集两者受试者外周静脉血5 ml,2 500 r/min离心8 min,收集上层血浆,加入等体积无菌PBS缓冲液,另取10 ml无菌离心管,加入等体积淋巴细胞分离液,缓慢加入外周血,离心机中2 500 r/min离心20 min,取出中间PBMCs层,加入4 ml PBS缓冲液,混匀,1 600 r/min离心6 min,弃上清并收集细胞,加入红细胞裂解液(2 ml),混匀,室温静置2 min,加入PBS缓冲液至8 ml,混匀后离心并收集细胞,采用RPMI1640培养基重悬细胞,调整细胞浓度2×10 细胞培养和转化 用含有10%胎牛血清、青霉素及链霉素的RPMI1640培养基培养Jurkat T细胞,置于37℃、5%CO mrt-pcr检测mir-33b和mycmna显示 CD4 wormbft检测纳米蛋白 取各组Jurkat T细胞及CD4 cd25和cd29表达水平 收集各组对数生长期Jurkat T细胞,用anti-CD3/28刺激Jurkat T细胞24 h,用anti-CD4-FITC、anti-CD25-PE、anti-CD69-PE-Cy7抗体标记后,置于流式细胞仪检测,采用FlowJo7.6软件分析CD25和CD69平均荧光强度(MFI)。 mtt显示细胞克隆 取各组对数生长期Jurkat T细胞,0.25%胰酶消化,接种至96孔板,每孔细胞密度为5×10 检测t细胞激活功能 分别将Jurkat T细胞铺于96孔U底板(2×10 双捕获光素酶活性检测 收集呈指数式生长的Jurkat T细胞,胰蛋白酶消化,制备细胞悬液,以每孔1×10 统计分析 采用统计学软件SPSS21.0进行分析,一般正态计量资料采用 2 结果 扩张性心肌病患者cd4 通过qRT-PCR法检测DCM患者CD4 mir-33b在jurkatt细胞表达的表达 分别将miR-33b mimic、miR-33b抑制剂(anti-miRNA)转染至Jurkat T细胞,转染48 h后采用qRT-PCR法检测Jurkat T细胞中miR-33b表达,结果显示miR-33b组Jurkat T细胞中miR-33b表达水平显著高于miR-con组,anti-miR-33b组Jurkat T细胞中miR-33b表达水平显著低于anti-miR-con组( mir-增加对jurkatt细胞增殖活性的影响 MTT检测Jurkat T细胞增殖能力,结果显示miR-33b 组 Jurkat T细胞增殖活性显著低于m