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白纹伊蚊感染wolba-chia的系统发育分析 沃尔巴克属动物，属于变形菌科、变形菌科、下克氏族、下克氏族和沃尔巴克氏族。这是一种广泛存在于动物中、卵传播到人类身上的革兰氏阴性细胞的共生菌。沃尔巴克氏体具有较高的遗传多样性, 目前已报道有A-Q共17个超群 (supergroup) 近年来蚊媒病在全球的流行呈现上升趋势, 其中许多是传播力强、流行面广、发病率高、危害性大的疾病, 已成为世界性的公共卫生问题 白纹伊蚊 (Aedes albopictus) 是登革热、黄热病、基孔肯雅热、西尼罗热等多种病毒的重要传播媒介。当前, 由于登革热等蚊媒病尚无特效药物和疫苗, 对传播媒介白纹伊蚊的防制是预防和控制蚊媒病疫情的主要手段。Zhang等 材料和方法 1 成蚊采集标本的鉴定 白纹伊蚊标本采自2014-2017年在中国的主要分布区, 具体信息见表1。成蚊利用人工诱集法或网捕法采集, 卵和幼虫带回实验室饲养至成蚊, 基于形态学特征对采集标本进行物种鉴定并区分雌雄。所有标本浸泡于95%无水乙醇中置20℃保存备用。 2 方法 2.1 dna的提取 基于形态学特征对白纹伊蚊样品进行物种鉴定后取单头个体, 使用组织/细胞DNA快速提取试剂盒 (北京全式金生物技术产品) , 按说明书步骤提取DNA, -20℃条件下保存备用。 2.2 基因促生殖器 参考文献 2.3 序列拼接、编辑和同源性比对 从GenBank数据库中检索的中国白纹伊蚊种群的wsp序列, 下载后用于受试蚊的比对分析。白纹伊蚊PCR产物所得双向测序结果利用DNAStar 7.1 (DNAS-TAR, Inc.1996) 软件包中的Seqman程序进行序列拼接和编辑, 确定序列的方向, 然后在NCBI中进行BLAST同源性比对。 将所有wsp基因序列在Mega 5.0 wsp基因构建的ml系统发育树 共获得23个地理种群的150条wsp基因序列, 其中73条属于wAlbA, 77条属于wAlbB (表1) 。经比对、拼接后最终用于分析的序列长度为522bp (wAlbA) 和475bp (wAlbB) 。基于已有的研究结果, 在感染wAlbA和wAlbB的白纹伊蚊中雌性个体的感染数量均明显高于雄蚊, 但白纹伊蚊感染沃尔巴克氏体的类型未见明显地区差异。wAlbA和wAlbB的种群间的遗传距离均较低, 分别为0～0.006和0～0.001, 表明不同地理种群白纹伊蚊感染的沃尔巴克氏体未发生明显分化。基于wsp基因构建的ML系统发育树见图1。wAlbA和wAlbB各自聚成一支, 支持率为100%。两个分支内部均未发生分化, 也未发现明显的地理格局。 不同地理种群白纹伊蚊个体感染沃尔巴克氏体的原因 沃尔巴克氏体宿主范围广泛, 并可通过多种方式调控宿主的生殖方式。沃尔巴克氏体的主要传播方式为垂直传播, 即通过雌性宿主生殖细胞的细胞质传递给子代。因此, 在一些类群中沃尔巴克氏体的系统发育关系与宿主一致, 即系统发育关系较近的宿主其感染的沃尔巴克氏体系统发育关系也应较近 自然界中约三分之二的昆虫均感染有沃尔巴克氏体, 但不是所有宿主与其所感染沃尔巴克氏体之间都存在协同进化关系, 部分昆虫是通过水平传播而不是垂直传播的方式感染沃尔巴克氏体的 前期研究发现, 我国不同地理种群的白纹伊蚊间出现了分化, 且有些种群间的分化较为明显 虽然我国的白纹伊蚊种群间出现了一些分化, 但由于白纹伊蚊扩散能力较强、且容易随着人类活动扩散, 所以大多数地理种群间的基因流仍很频繁, 这也为沃尔巴克氏体的水平转移提供了条件。其次, 白纹伊蚊的雌性个体吸食动物血液, 对叮咬对象无明显偏好性和选择性;而雄性个体取食植物汁液或花蜜, 更无选择性。再次, 白纹伊蚊的虫卵、幼虫和蛹期所生活的水体也为沃尔巴克氏体的水平转移提供了有利条件。由此看来, 宿主的扩散交流, 以及宿主取食对象和生境的重叠均促使了不同地理种群白纹伊蚊个体感染沃尔巴克氏体的水平转移。 沃尔巴克氏体已被广泛用于登革热的防控, 本研究证实水平转移使得不同地理种群白纹伊蚊感染的沃尔巴克氏体间未发生明显分化, 这为利用沃尔巴克氏体开展蚊媒病的防控提供了理论基础, 保证了沃尔巴克氏体对蚊虫生殖调控的效率不会受到株系间分化的影响。