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胶原诱导型关节炎大鼠模型的建立与药物干预的评价 类风湿性关节炎（ra）是一种生长缓慢、系统性自身免疫性疾病，主要以关节和关节周围组织的非感染性炎症为主，其特征性病理改变为滑膜炎和滑膜增生，最终导致软骨侵蚀和关节破坏。 1 材料和方法 2 结果 2.2 各组大鼠足跖水肿的比较 在致炎20d可见模型组大鼠足跖肿胀明显, 与正常组比较有显著差异, 在致炎40d时, 模型组大鼠足跖肿胀因其炎症反应已从急性期过度至慢性期虽呈降低趋势, 但其足跖厚度仍然远远高于正常组, 且降低幅度不如激素组明显, 模型组与激素组有统计学差异。 2.3 足无血清胞模型 可见正常组大鼠在整个实验过程中足爪无肿胀表现, 而模型组大鼠在致炎20d出现明显的足爪红肿现象 ( 包括足背侧、 足跖侧) , 致炎40d模型组大鼠足爪无法完全展开, 肿胀较前减轻, 但关节畸形明显。致炎40d激素组大鼠足爪肿胀较前明显减轻。 2.4 足跖部组织水肿 正常组大鼠足爪无异常, 未见骨质破坏表现, 而模型组大鼠致炎20d可见双侧足爪软组织肿胀阴影, 在双侧足爪足跖部可见骨质破坏碎裂, 在致炎40d, 模型组大鼠可见双侧足爪软组织肿胀阴影, 但肿胀较前减轻, 足跖部可见骨质破坏碎裂 ( 其中圆形图案所示部位为骨质破坏部位) 。激素组几乎未见足跖部骨质破坏碎裂。 2.5 各组大鼠血清tnf-含量的比较 致炎后40d ( 即用药20d后) 可见模型组血清TNF-α 含量显著高于正常及激素组, 说明在模型成立后用激素干预CIA大鼠20d, 可有效降低CIA大鼠血清TNF-α 含量。 2.6 tnf-表达 可见模型组膝关节滑膜中TNF-α 表达相对于正常、激素组增强。而激素组TNF-α 表达明显低于模型组。说明激素应用后可有效降低膝关节滑膜中TNF-α 表达量。 3 ra的模型构成 本研究选取牛Ⅱ型胶原和不完全氟氏佐剂制作类风湿性关节炎的CIA大鼠模型。牛Ⅱ型胶原作用于大鼠, 模拟了人类风湿性关节炎的细胞自身免疫过程。牛Ⅱ型胶原刺激大鼠的免疫细胞产生免疫应答, 随后产生抗体, 识别并结合牛Ⅱ型胶原形成免疫复合体, 导致关节、软骨和滑膜的损害。目前国内外关于CIA大鼠模型制作的文献, 因选用何种胶原、胶原用量、选取致炎部位, 是否加强注射方面不统一, 制作的方法很多, 但在前期的预试根据某些文献制作CIA大鼠模型, 虽CIA大鼠足跖肿胀是有所体现的, 但未能发现CIA大鼠明显的骨骼和关节的改变, 故实验者认为仅凭足跖肿胀, 不能充分说明CIA大鼠模型成立, 因为类风湿性关节炎不能仅凭大鼠炎症表现如肿胀则认为成功模拟了该疾病。实验者最终选用了每只大鼠注射等量的牛Ⅱ型胶原和不完全氟氏佐剂乳化剂0. 4ml ( 含胶原400μg) , 同样方法在致炎14d加强注射乳化剂0. 1ml ( 含胶原100μg) 。第一次于大鼠足跖部皮下注射牛Ⅱ型胶原和不完全氟氏佐剂的乳化剂致炎, 注射的足跖当日就出现红肿的表现, 然后逐渐加重, 并向对侧蔓延, 在第一次致炎后的14d, 进行加强注射, 肿胀较前加重, 并于致炎20d达高峰, 测其足跖厚度平均可达0. 65cm左右 ( 为了说明RA的发病机制是一全身免疫反应, 而且实验中也看到了不仅是致炎部位的足跖肿胀, 其对侧足亦发生肿胀, 故特地设计测量未致炎足即左足的足跖厚度) , 进一步拍摄各组大鼠足爪肿胀的照片, 结合足爪X-ray照射, 得出在致炎20d, 模型组出现了明显的炎症表现, 且出现骨质破坏后关节和软骨的较明显改变, 如关节畸形和限制行步态的表现, 可说明在致炎20d即可成模。证明成模的当日激素组即开始采用激素干预, 并且连用20d, 每两日1 次灌胃给药, 激素组大鼠直至致炎40d ( 即用激素的20d) , 大鼠的足肿胀度、足跖厚度相对于模型组有明显改善, 限制性步态消失, 结合足爪X-ray检测, 发现激素显著改善类风湿性关节炎大鼠的骨质破坏并能逆转关节软骨损害, 同时亦说明致炎20d时采用激素药物干预, 连用20d作为一个疗程, 是能够逆转类风湿性关节炎损害的。在实验中经过重复3 次该种造模方法, 可明确此种造模方法及选择用药时机的方案是比较稳定的, 重复性较好的。 目前常用的判断RA模型成立的方法如足跖厚度的测量, 实验者所测的足跖厚度与国内外很多文献是吻合的。在证明成模时不仅选用测其足跖肿胀度, 且为观察骨质破坏、关节畸形, 需结合其大体图片及足爪X-ray检测, 实验者选用三个方面: 1) 足跖厚度, 2) 足爪大体图片, 3) 足爪X-ray检测来证明模型成立。而且相对某些文献的报道来看, 在较短的时间内建立了CIA大鼠模型, 选择了一个较佳的注射部位方便操作, 且成模率较高 ( 在实验中用该方法建模, 几乎所有的大鼠都观察到了足