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黑芽苗菜叶绿素提取方法的比较研究 黑豆，通常被称为豆苗。它口感细腻，营养丰富，钙、磷、铁、钾等矿物和多种维生素。此外，它具有很高的药用价值。它又冷又甜。具有活血化瘀、清热消肿、强肝明目的的功效。更为重要的是黑豆芽富含叶绿素。叶绿素分子结构与人体内的血液分子相似, 非常易溶入红细胞中, 能抑制细菌、排出毒素, 有“绿色血液”之称。研究表明, 豆芽中的叶绿素能分解人体内的亚硝酸胺, 能够起到预防直肠癌等多种消化道恶性肿瘤的作用。因此, 研究黑豆芽的叶绿素测定提取方法, 对于提高其品质和黑豆芽叶绿素深度开发具有重要意义。关于叶绿素含量测定方法使用较多的是Arnon法, 但是Arnon法需要把植物材料研磨和去残渣, 提取时间长, 工作量和操作误差大。20世纪80年代初张宪政 1 材料和方法 1.1 万分之一天麻仪器厂 黑豆芽购于市场;722型分光光度计:上海光学仪器厂;万分之一天平:上海天平仪器厂;丙酮、乙醇:分析纯, 按体积比配制浸提液:95%乙醇, 丙酮∶乙醇=1∶1, 80%丙酮分别用A、B、C表示。 1.2 研磨法和直接浸提法提取叶绿素 预处理样品, 取黑豆芽适量, 用纱布或吸水纸吸干表面的水分, 将子叶等剪成小于2 mm碎条, 混匀, 分成2份。提取测量, 一份在室温 (25℃) 下, 立即用研磨法和直接浸提法 (A、B、C 3种提取液) 提取叶绿素。其中浸提法, 称取1 g处理好的样品置于50 m L容量瓶中加入相应提取液, 定容, 混匀, 封口, 置于黑暗条件下直接浸提。待组织完全变白, 分别在波长663、645、470 nm下测定吸光度值。另一份用天平精准称取 (1 g, 9份) , 分别装袋, 密封好, 放到冰箱冷冻6 h, 取出以浸提法测定吸光度值。浸提法、研磨法、冷冻浸提法每个处理各重复3次。 1.3 处理数据 叶绿素含量的计算: C 2 结果与分析 2.1 黑麦芽糖叶绿素含量 各种方法提取结果见表1。 由表1可见, 黑豆芽 (不包括胚轴和胚根) 叶绿素含量为0.167 7 mg/g (鲜重) , a/b为2.524。 2.2 研磨法和冷冻浸提法提取叶绿素 研磨法、浸提法、冷冻浸提法3种提取方法, 对于叶绿素a、b提取结果表现一致, 以冷冻浸提法提取效果最好, 其次为研磨法, 再次为浸提法 (表2) 。 浸提法提取效果最差, 一方面可能提取不完全, 也可能在提取的过程中叶绿素有分解, 相对冷冻浸提法, 由于经过了冷冻过程破碎了细胞, 提取完全而且提取过程快减少了叶绿素分解, 效果最好。研磨法在研磨、过滤等操作的过程中有损失, 而且提取时间过程长造成弱光下叶绿素的分解, 效果不及冷冻浸提法。叶绿素含量提取效果的单变量方差分析, 见表3。 由表3单变量方差分析表明, 叶绿素a Sig.=0.749, P0.05, 叶绿素b Sig.=0.145, P0.05, 即不同提取方法间差异不显著。 2.3 不同提取液提取效果 不同提取液提取效果比较, 见表4。 由表4可见, 不同提取液提取效果, 对于叶绿素a、b提取结果表现一致, 以95%乙醇提取效果最好, 其次乙醇丙酮1∶1混合, 再次为80%丙酮。由表2单变量方差分析表明, 叶绿素a Sig.=0.000, P0.01, 叶绿素b Sig.=0.001, P0.01, 即不同提取液提取效果差异极显著。进一步进行不同提取液提取效果多重比较分析表明 (表5) 。 由表5可知, 除叶绿素b丙酮乙醇1∶1混合提取液和80%丙酮提取液间差异不显著, 其余各处理间差异显著。单种提取液95%乙醇提取效果最好, 与明华等对玉米叶叶绿素提取研究结论一致, 但乙醇丙酮1∶1混合液的提取效果不及95%乙醇, 又与明华、李得孝 由表6对95%乙醇提取液的3种方法提取效果比较也可看出, 提取黑豆芽叶绿素以95%乙醇为提取液, 以冷冻浸提效果最好。 3 不同提取方法对黑芽叶绿素提取效果的影响 1) 研磨法、浸提法、冷冻浸提法3种方法提取黑豆芽叶绿素, 对于叶绿素a、b提取结果表现一致, 以冷冻浸提法提取效果最好, 其次为研磨法, 再次为浸提法, 但不同提取方法间差异不显著。尽管3种方法提取效果差异不显著, 但研磨法工作量大, 提取时间长;浸提法提取值偏低;冷冻浸提法速度快且效果好, 故在黑豆芽叶绿素提取中可采用冷冻浸提法。 2) 3种提取液提取黑豆芽叶绿素, 叶绿素a、b提取结果表现一致, 以95%乙醇提取效果最好, 其次乙醇丙酮1∶1混合液, 再次为80%丙酮, 且3种提取液提取效果差异极显著。结合上文分析黑豆芽叶绿素以95%乙醇为提取液, 以冷冻浸提效果最好。 3) 本文在冷冻浸提中并未对冷冻处理的时间进行深入研究, 在对混合提取液的研究中也仅对乙醇丙酮1∶1混合比例进行了研究, 有学者认为