肝内型门静脉高压症大鼠肺组织结构变化与低氧血症的关系.docxVIP

肝内型门静脉高压症大鼠肺组织结构变化与低氧血症的关系 在本研究中，我们建立了肝内门静脉高压症（ihph）、肝前门静脉高压症（phh）和门腔分流性老鼠模型（pcs）。在观察不同类型的门静脉高压症鼠和ihph形成过程中，肺组织结构的变化与动脉血气的变化之间存在着关系。 ccl4注射 一、实验动物和模型制备雄性SD大鼠(250~300 g,由上海医科大学动物饲养中心提供)被随机分成4组:PHPH组(8只)、IHPH组(32只)、PCS组(8只)和手术对照组(SO组,8只)。IHPH鼠又分4个亚组:即CCl4注射4次、8次、12次和16次,每组各8只。 1.PHPH的制备:经盐酸氯胺酮麻醉(100 mg/kg,肌注)下开腹,分离门静脉主干,7号钝头针并置于门静脉后,在胃冠状静脉上方一同结扎,然后移去钝头针,形成门静脉缩窄程度一致的PHPH。 2.IHPH的制备:60% CCl4油溶液按0.3 ml/100 g体重肌肉注射(首次剂量加倍),每4 d 1次,同时饮10%乙醇,分4个时间点(4组)观察,即CCl4注射4次、8次、12次和16次。 3.PCS的制备:乙醚麻醉下正中切口进腹,分离门静脉和下腔静脉,结扎、切断胃冠状静脉,近门静脉左右支分叉处结扎切断,门静脉与下腔静脉近右肾静脉水平行门腔端侧吻合。 4.SO鼠的制备:盐酸氯胺酮麻醉下进腹,游离门静脉和下腔静脉,约10 min后关腹。 二、观察时间和实验过程 在PHPH、PCS和SO鼠模型制备成功后2周、IHPH鼠在注射CCl44次、8次、12次和16次后2周测定门静脉压力,采集血及组织标本。实验前12 h大鼠禁食不禁水。大鼠在盐酸氯胺酮麻醉下放置在恒温手术台上,经右股动脉插入PE50导管,正中切口进腹,经回盲静脉插入导管至门静脉,由换能器连接Colins监护仪,测游离门静脉压力(FPP)。经股动脉插管取动脉血,行动脉血气分析和肝功能检查。 三、肝肺组织病理学检查 由专一病理医师行肝肺组织病理学检查。取石蜡包埋肺组织,行James′s网状纤维和改良弹力纤维染色。用Ⅷ因子相关抗原、抗体行免疫组织化学染色,观察微血管密度,同时设阴性和阳性对照。 四、图像分析和半定量计数 在肺呼吸部随机取10个高倍视野,对免疫组织化学和特殊染色等采用单盲法,应用HP1AS-1 000高清晰度彩色病理图文管理系统,由专一病理医师进行图像分析。测定肺泡微血管密度;每个视野测5~10个肺泡毛细血管直径,取均值;测定肺泡间隔、肺泡腔以及网状、弹力和胶原纤维占测量窗面积的百分比,反映肺泡间隔增宽和肺泡腔容量变化以及3种纤维含量变化。 五、统计学方法 所有结果用均数±标准差表示,数据经SAS统计软件包处理,用单因素方差分析,Duncan检验法进行组间差异比较,用Pearson法进行相关性检验。 结果 一、 肝重与体重比率 CCL4注射16次组大鼠肝功能显著受损,伴门静脉压力升高,已形成了IHPH。PHPH组、PCS组肝功能轻度受损。IHPH组肝重与体重比率较SO组明显增大,PHPH组和PCS组肝脏则有不同程度萎缩。肺重与体重比率在各组间无明显变化。 二、 呼吸中毒种的检测 IHPH组的PaO2下降和肺泡-动脉氧压力梯度(A-aG)[A-aG=150-PaO2-PaCO2/0.8 (?mm?Hg)]增大较其他组差异有显著意义,并伴轻度呼吸性碱中毒。在IHPH形成过程中,PaO2呈阶梯状下降,A-aG呈阶梯状增大(表1)。 三、 硬变节现象 随着CCl4注射次数增多,肝脏逐渐肿大,注射16次以后肝脏质地变硬、边缘变钝,表面出现硬变结节。光镜下可见肝细胞变性、坏死逐渐加重,并伴有炎症细胞浸润,肝小叶结构完全破坏,大量纤维组织增生、假小叶形成,已形成了IHPH。PHPH组和PCS组的肝脏有不同程度萎缩,但肝小叶结构完好,无纤维组织增生。 四、 纤维组织生成 所有大鼠肺大体均无明显变化。光镜下未见肺间质水肿,肺泡细胞无变性坏死,肺泡形态正常,肺泡壁无塌陷,无炎性细胞浸润、纤维组织增生和透明膜形成。 1. 正乳剂用量对ihph形成过程的影响 IHPH组、PHPH组和PCS组的肺泡间隔较SO组显著增宽、肺泡容量较SO组显著减小,IHPH组与PHPH组和PCS组比较,肺泡间隔增宽和肺泡腔减小差异有显著意义。在IHPH形成过程中,肺泡间隔逐步增宽、肺泡容量逐步减小。各组的网状、胶原和弹力纤维差异均无显著意义(表2)。 2. 正解对馒头毛细管密度的影响 IHPH组肺泡毛细血管直径显著大于PHPH组和PCS组,而PHPH组和PCS组较SO组显著增大。与SO组相比,IHPH 组、PHPH组和PCS组的肺泡毛细血管密度显著增加,IHPH组又显著高于PHPH组、PCS组。在IHPH形成过程中,肺泡毛细血管直径逐步地增大、微血管密度 逐步增高(表