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门静脉高压症脾亢患者外周血cd4 适应性t细胞（treg）具有自体外的免疫调节功能，分为自然treg细胞和适应性treg细胞。自然Treg细胞有免疫无能性和免疫抑制性两大功能特性,是机体免疫功能调节的重要机制之一。研究发现,用CD4+CD25+CD127low/-Treg代表自然Treg,能区别有活化效应的辅助性T淋巴细胞。门静脉高压症(PHT)合并脾功能亢进(脾亢)时,患者的免疫功能处于紊乱状态,但其调节机制尚不清楚。本研究通过流式细胞术检测PHT脾亢患者外周血中CD4+CD25+CD127low/-Treg及CD3+、CD4+、CD8+T细胞的表达变化,探讨CD4+CD25+CD127low/-Treg在门静脉高压症脾亢时脾脏免疫功能调节中的作用及临床意义。 1 数据和方法 1.1 胃底宣传检查 2009年4~8月我院收治的20例肝硬化PHT患者,男12例,女8例,年龄39~88岁。腹部B超均显示肝硬化、脾肿大。血细胞一系或多系减少。14例行胃镜检查示食管胃底静脉曲张。健康对照组18例,为2009年6~8月在我院健康体检的成人,年龄31~68岁。 1.2 细胞仪和仪器 荧光标记的鼠抗人单抗CD4-PE、CD25-FITC、CD127-Alexa Fluor誖647,CD3-PE、CD8-FITC、阴性对照mouse Ig G1 FITC和Ig G1Alexa Fluor誖647,红细胞裂解液Lysing Buffer,FACSCalibur流式细胞仪,均购自美国BD Bioscience公司。 1.3 抗凝全血药血药浓度监测 EDTA管收集外周静脉血后3 h内进行检测。每例标本取三个试管,分别加CD4-PE/mouse Ig G1 FITC/Ig G1 Alexa Fluor誖647、CD4-PE/CD25 FITC/CD127 Alexa Fluor誖647及CD3-PE/CD8-FITC各10μL,每管再加入100μL抗凝全血后混匀避光孵育25 min;加2 m L 1×Lysing Buffer,混匀避光孵育15 min;溶血后PBS洗2次,最后加200μL含1%多聚甲醛PBS重悬并流式细胞仪上机检测。 1.4 统计方法 2 结果 2.1 reg、cd4+、cd3+、cd8+t细胞的含量 脾亢组患者CD4+CD25+CD127low/-Treg占CD4+T细胞的比例明显高于对照组(P0.01)。脾亢组CD3+、CD4+、CD8+T细胞的含量均低于对照组(P0.05)。见表1、图1。 2.2 eg含量与cd3+t细胞相关性分析 脾亢组CD4+CD25+CD127low/-Treg含量与CD3+T细胞显著负相关(r=-0.630,P0.01,见图2);与CD4+T细胞呈负相关(r=-0.561,P0.05,见图3)。 3 cd3和cd127对免疫功能的影响 CD4+CD25+Treg是研究较为深入的自然Treg,其具有免疫无能性和免疫抑制性两大功能特性。其免疫无能性表现在对高浓度IL-2的单独刺激,固相包被或可溶性抗CD3单抗,以及抗CD3单抗、抗CD28单抗的联合作用呈无应答状态,也不分泌IL-2。免疫抑制性表现在经TCR介导的信号刺激活化以后能够抑制CD4+和CD8+T细胞的活化和增殖。CD127是白细胞介素(IL)-7受体α链,其表达对T淋巴细胞的成熟、维持及免疫应答发挥着重要作用。近几年来主要以CD4+CD25high和Foxp3(叉头翼状螺旋转录因子)作为人CD4+CD25+Treg的特异性标记物。但Foxp3为细胞核染色,标记后细胞被破坏,不能用于进一步培养和研究,而且并不是所有Foxp3阳性的细胞都是调节性T细胞,因为Morgan等发现人类Foxp3m RNA不仅在CD25+T细胞上表达,在CD25-T细胞活化后也可短暂表达。Liu等发现CD127与Foxp3表达呈负相关,Seddiki等发现CD4+T细胞活化后高表达CD127,即CD4+CD25+CD127high,而真正有活化效应的调节性T细胞仅低表达CD127,即CD4+CD25+CD127low/-。研究表明CD4+CD25+CD127low/-是自然产生的Treg最好的细胞膜标志物。 在PHT脾功能亢进的治疗中,手术是否保留脾脏的争议较多,其中最主要的争论在于对脾脏免疫功能的认识。脾脏是机体最活跃的免疫器官,每天约有身体总淋巴细胞数的1/4通过脾脏。目前对肿大的脾脏的免疫功能评价尚未达成统一认识,其调节机制尚不清楚。CD表示“分化群”,是指一个单克隆抗体细胞群识别的一个分子,是识别淋巴细胞的标记物。CD细胞在机体特异性免疫应答及免疫调节中起重要作用。维持机体正常的免疫功能,有赖于各种免疫细胞特别是T细胞亚群之间相互协作或制约。目前对脾亢时脾脏免