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氮磷对铜绿微囊藻生长的影响 微囊藻是一种全球分布的蓝色藻。在中国大多数富营养化水域中，铜绿微囊藻在数量和发生频率上占据着主导地位。国内外科学家都在关注铜绿微藻。一般来说，池塘营养化的主要药物是氮和磷，其中磷的限制作用也来自氮的前面。然而，关于铜绿微藻的生长和氮盐和磷盐等养分的养分比例的文献很少。此外，人们对铜绿微藻的生长与氮、磷等养分的比例缺乏深入的了解。此外,浮游植物生长过程一般经历延滞期、指数生长期和稳定期3个阶段,由此表现出“S”型曲线。所以目前人们主要采用的指数模型难以对其进行准确、完整的描述,而采用“S”型模型描述浮游植物生长曲线的报道较少。因此本文以铜绿微囊藻为对象,在微生物生长动力学的基础上研究了不同氮盐、磷盐组成对铜绿微囊藻生长的影响。 1 材料和方法 1.1 实验藻种的纯化 用25号浮游生物网,在秦皇岛市洋河水库城市供水口处采集野生微囊藻,经显微镜观察、预备培养、微细管分离、灭菌等步骤得到纯化的实验藻种。然后将纯化藻种保存在BG-11培养液中,在温度(28±1)℃、光照强度约为3 000lx、光暗比12h:12h等条件下进行培养。 1.2 初始tp浓度的确定 整个试验以BG-11培养液为基础,氮盐和磷盐浓度则根据试验要求设计。具体而言,对于其中1个系列试验,设计初始TN浓度相同,约为1.5g/L,而TP初始浓度范围为0.05~16.0mg/L(表1)。对于另一个系列试验,设计初始TP浓度相同,约为40 mg/L,而TN的初始浓度范围为0.1~100.0mg/L(表2)。这样在无菌条件下,将长势良好的铜绿微囊藻藻种转移到4L的BG-11培养液中,接种密度大约为5.0×104cells/mL。然后在与藻种保存系统相同的条件下进行培养试验,根据生长状况试验周期约(7±2)d。根据试验要求每天定时从培养瓶中取50mL样品,用血球计数板显微镜目视计数法测量铜绿微囊藻细胞数量,当每组试验每天的平均增长值低于5%时,认为该组试验已达到最大生物现存量,即可停止测定。 2 结果与分析 2.1 铜绿微囊藻生物量的变化 图1和图2为铜绿微囊藻在不同TP、TN营养盐浓度条件下的生长曲线。结果表明铜绿微囊藻的生长经历了延滞期、指数增长期和稳定期3个阶段,由此表现为“S”型曲线,在延滞期,铜绿微囊藻生长缓慢,在开始的3d内生物量基本保持不变,到指数增长期,由于大部分细胞处于分裂期,在2~3d内其生物量迅速增加,由8×105cells/mL增加到2×106cells/mL,甚至可高达4×106cells/mL。随着铜绿微囊藻生物量的迅速增加,氮盐和磷盐被大量消耗,大部分细胞逐渐停止分裂,并且部分细胞开始死亡,从而使铜绿微囊藻生长进入稳定期,其生物量基本保持不变,这一结果符合洋河水库夏季“水华”在几天内暴发的现象。 2.2 营养盐生长阈值tp 氮、磷是藻类生长所需的重要营养盐,也是许多湖泊学家关注的重要环境因子。 图3、图4反映了不同TN、TP浓度对铜绿微囊藻生长的影响情况。 从图3、图4中可以看出,在营养盐浓度较低范围内,随着营养盐浓度增加会促进铜绿微囊藻的生长,但在高浓度范围内,其生长反而受营养盐浓度增加的限制。如图3所示,当TP初始浓度在较低范围时,即TP1.80mg/L时,铜绿微囊藻的生物量随着TP浓度增加而增大,但超过上述浓度范围,生物量反而随着TP浓度增加而降低。TN的初始浓度对铜绿微囊藻的影响与TP相似(图4),当TN 25.0mg/L左右时,铜绿微囊藻的生物量随着TN浓度的增加而增大,但超出上述浓度范围,其生物量反而随着TN浓度的增加而降低。为表述方便,可以将上述TN、TP对铜绿微囊藻生长促进——限制转折点时的初始浓度定义为营养盐生长阈值,分别用CTP、CTN表示。 进一步分析图3和图4结果似乎表明,当TPCTP时,随着TP浓度的增加,铜绿微囊藻受TP的限制程度逐渐降低,由此促进其生长,从而表现为生物量逐渐增大。然而,当TPCTP时,随着TP浓度的增加,尽管铜绿微囊藻生长受TP的限制程度逐渐降低,但是由于TN的浓度相对减小,受TN的限制程度却逐渐增强,由此可能限制了其生长,从而表现为生物量的下降。同样,在TNCTN和TNCTN范围内,TN对铜绿微囊藻生长的影响与TP相同。这表明,不仅适宜的TP、TN等营养盐范围是决定铜绿微囊藻生长状况的重要条件,浓度过低或过高均对生长不利,而且似乎也表明TP、TN等营养盐的比例也是决定铜绿微囊藻生长状况的重要条件。实际上,研究表明,浮游植物的生长不仅决定于TP、TN等营养盐浓度的大小,而且也与其比例有关。 2.3 tn初始浓度对铜绿微囊藻生长的影响 日本的合田健对TN/TP值与藻类增殖的关系做了研究后认为,其比值在12∶1~13∶1之间最适宜藻类增殖,在8~25之间和藻类增殖显著相关。在本