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富马酸依美蒂斯在健康人体血浆中的浓度及其药动学研究 氨基乙酸钠-2-氨基乙酸钠甲基酯磺酸盐是胺组织h的抗剂。与同类药物相比，具有强疗效、选择性高、反应快、副作用少、滴眼液等特点。3岁以上的儿童适合。于1993 年,其在日本上市,用于治疗过敏性鼻炎和慢性荨麻疹。1997 年,获FDA 批准在美国上市,用于治疗季节性过敏性结膜炎,剂型为滴眼液。 由于富马酸依美斯汀服药量小,血浆浓度低,其人体药代动力学研究在国外文献报道中多采用放射性受体测定法(redio-receptor assay)和C-14同位素标记法;国内尚无相关报道。本研究建立了人血浆中富马酸依美斯汀浓度的准确高灵敏的液相色谱-串联质谱(HPLC-MS-MS)测定法,并用于富马酸依美斯汀在中国健康男性受试者体内药代动力学研究。 仪器与检测方法 1药品、试剂与仪器 试验制剂:富马酸依美斯汀缓释胶囊,规格:每粒2 mg,批号:030802;对照品:富马酸依美斯汀,纯度≥99.0%,杭州民生药业集团有限公司研制和提供;内标:盐酸哌唑嗪对照品,购于中国药品生物制品检定所。甲醇色,谱纯,德国Merck公司生产;乙酸乙酯、醋酸铵均为分析纯试剂,南京化学试剂厂生产;溶液配制均用自制双蒸水;空白血浆,为南京红十字会血站提供的健康人血浆。 LC-TSQ Quantum Ultra AM色谱-串联四极质谱系统,美国Thermo-Finnigan科技公司产品;TGL-16G离心机,上海安亭科学仪器有限公司产品。 富马酸依美斯汀对照溶液制备精密称取富马酸依美斯汀适量,以甲醇为溶剂溶解,并定量稀释制成浓度分别为0.01 ,0.10 μg· mL-1的溶液。 盐酸哌唑嗪(内标)溶液制备精密称取盐酸哌唑嗪适量,以甲醇为溶剂溶解,并定量稀释制成浓 度为0.50 μg· mL-1溶液。 2受试者选择 12名男性健康志愿受试者,年龄为19~21岁,体重为56~70 kg,身高为167~180 cm。 3给药方法与血样采集 受试者禁食过夜;次日晨,口服富马酸依美斯汀缓释胶囊2 mg。 于服药前及服药后1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,8.0,10.0,12.0,14.0,16.0,24.0和36.0 h,分别自肘静脉取血约3.5 mL,置肝素化离心管中,离心分取血浆,于-20℃保存,供血药浓度测定。 4液相色谱-串联质谱条件 色谱Sepax HP-C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),(Sepax Technologies, Inc.);流动相:甲醇-0.25%醋酸铵溶液(85∶15);流量为0.6 mL·min-1;柱温:300C;进样体积30 μL。 质谱API-ES正离子选择性反应检测,经条件优化确定质谱参数。加热毛细管温度3500C,喷雾电压4 500 V,碰撞诱导解离CID电压均为35 eV。富马酸依美斯汀的SRM离子为m/z 303→m/z 246(依美斯汀);盐酸哌唑嗪(内标)的SRM离子为m/z 384→m/z 350(哌唑嗪)。 5血样处理 精密吸取血浆0.50 mL,置10 mL离心管中,精密加入0.50 μg·mL-1内标溶液20 μL,并加入2mol·L-1氢氧化钠溶液200 μL,涡旋混匀0.5 min;加乙酸乙酯5.0 mL,涡旋3 min; 3 500 r·min-1离心10 min, 分取上层有机相4.0 mL; 370C水浴中,氮气吹干,残留物加入流动相50 μL涡旋溶解;15 000 r·min-1离心10 min, 取上清液30 μL;按上述“液相色谱-串联质谱”进行分析。 6方法学考察与评价 6.1专属性 空白血浆,空白血浆加富马酸依美斯汀和盐酸哌唑嗪、及健康受试者口服受试胶囊后的色谱见图1。富马酸依美斯汀的保留时间为6.3 min,内标保留时间为5.0 min,内源性杂质无干扰,内标响应稳定。 6.2标准曲线制备 取空白血浆0.50 mL,精密加入富马酸依美斯汀对照溶液适量,制成富马酸依美斯汀血浆浓度分别为0.05,0.1,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0和16.0 ng· mL-1的系列血浆样本,并分析测定。富马酸依美斯汀血浆浓度在0.050~16.0 ng·mL-1,色谱响应有良好线性关系;标准曲线方程为R=0.2155C+0.0039,γ=0.9987(C浓度,R峰面积比值)。 A. Blank plasma sample;B. Blank plasma spiked with 0.05 ng·mL-1of emedastine difumarate (tR=6.3min) and 20.0 ng·mL-1of prazosine hydrochloride (internal standard,tR=5.0