山海关杨PdERF-18转录因子的表达特征分析.docxVIP

? ? 山海关杨PdERF-18转录因子的表达特征分析 ? ? 王庆灵，刘文鑫，赵嘉平 （1.中国林业科学研究院林业新技术研究所林木遗传育种国家重点开放试验室，北京 100091；2.中国林业科学研究院热带林业实验中心，广西凭祥 532600；3.河北农业大学林学院，河北保定 071001） 山海关杨PdERF-18转录因子的表达特征分析 王庆灵1，2，刘文鑫3，赵嘉平1 （1.中国林业科学研究院林业新技术研究所林木遗传育种国家重点开放试验室，北京 100091；2.中国林业科学研究院热带林业实验中心，广西凭祥 532600；3.河北农业大学林学院，河北保定 071001） 对一个溃疡病菌Botryosphaeriadothidea胁迫相关的山海关杨Populusdeltoides‘Shanghaiguan乙烯反应因子（ethylene responsive factors，ERFs）基因——PdERF-18基因的系统发育、编码产物结构以及多种胁迫下的表达模式进行了分析。结果表明：PdERF-18基因编码产物属于ERF转录因子家族B-6类群，具有植物ERF转录因子的典型结构，但它与转录调控功能密切相关的AP2/ERF结构域第19位氨基酸位点发生替换，推测PdERF-18基因可能具有不同于其他典型ERF转录因子的功能；实时定量分析表明：溃疡病菌、根癌农杆菌Agrobacteriumtumefaciens（Rhizobiumradiobacter），脱水、机械胁迫、盐胁迫和高温处理、茉莉酸以及水杨酸处理均可诱导PdERF-18基因的上调表达。其中溃疡病菌与茉莉酸处理以及根癌农杆菌与水杨酸处理下，杨树PdERF-18基因分别具有相似的表达特征，显示溃疡病菌、根癌农杆菌侵染的信号转导可能分别与茉莉酸/乙烯途径、水杨酸信号传导途径有关。PdERF-18基因可以对多种非生物、生物胁迫产生响应，PdERF-18基因有可能作为一种新的遗传资源而应用于杨树抗性遗传改良。图4参30 林木育种学；山海关杨；乙烯反应因子；PdERF-18；水杨酸；茉莉酸；杨树溃疡病 AP2（APETALA2）/ERF（ethylene responsive factor，ERF）转录因子超家族是植物中重要的转录因子类型，其共同的结构特征是在DNA结合区包含1个或多个由约60～70个氨基酸组成的高度保守的AP2/ ERF结构域。根据结构域数目及其所结合的顺式作用元件的差异，AP2/ERF转录因子超家族可分为：AP2，乙烯反应因子，干旱反应元件结合蛋白（dehydration responsive element binding protein，DREB）和RAV 4个转录因子家族。ERFs是植物中特有的转录因子家族，研究证实ERF转录因子参与调控包括植物生长、发育在内的多个生物学过程［1-3］。另外，通过AP2/ERF结构域和PR基因启动子顺式作用元件GCC-box（AGCCGCC）的结合，ERF基因参与植物对环境刺激，尤其是对病原菌胁迫的响应。为了发现AP2/ERF转录因子在林木抗非生物胁迫以及抗病性中的作用，近年来，一些研究者对多年生木本模式植物——杨树Populusspp.的ERF和DREB转录因子进行了深入研究。Nanjo等［4］在脱水、高盐、高温、冷冻、脱落酸以及过氧化氢处理后的意大利杨Populusnigravar.italicaEST文库鉴定到13个ERF/AP2转录因子，其中一些仅在特定的环境胁迫下特异表达。Zhuang等［5］对杨树AP2/ERF转录因子超家族进行了全基因组分析，鉴别出了91个ERF转录因子以及77个DREB转录因子。Maki等［6］发现欧洲黑杨PopulusnigraERF基因——PncERF1基因在室温生长的杨树细胞内不表达，仅对低温处理后产生响应表达。Li等［7］报道转番茄SolanumlycopersicumERF转录因子的杂交杨Populusalba×Populusberolinensis获得了对盐胁迫的抗性，并且在200.0mmol·L-1氯化钠下，转基因杨的干物质总量、树高，叶片中脯氨酸含量、钠离子（Na+）含量均高于非转基因杨。最近，应用数字基因表达方法（digital gene expression，DGE），Chen等［8］发现了2个盐胁迫后下调表达的小黑杨Populussimonii×PopulusnigraAP2/ERF转录因子。此外，研究发现ERF转录因子也在杨树顶芽的休眠诱导和维持过程中表达［9］。近来，作者在溃疡病菌胁迫的多种杨树杂交无性系中发现1个特定ERF转录因子基因（ERF-18基因）的上调表达，预期该基因可能与杨树的抗逆反应相关。为深入揭示该基因的功能，本研究对中国优良杨树乡土树种——山海