山药总黄酮的提取及抗氧化活性研究.docxVIP

? ? 山药总黄酮的提取及抗氧化活性研究 ? ? 刘文全，罗 怡，朱守虎，周瑾瑞，王俊豪，张 齐 （安徽科技学院食品工程学院，安徽凤阳 233100） 山药又称山芋、淮山、薯蓣，为多年生缠绕草本植物。山药的原产地是河南焦作，现已在湖南、湖北、山西、云南、河北、安徽、江苏等地广泛种植。作为清代贡品，具有很高的营养价值和药用价值，还具有抗氧化[1]、抗菌消炎[2]、抗肿瘤[3]、降血糖、降胆固醇等多种功能，属于药食同源食品。山药肉质中含有丰富的黄酮类化合物、淀粉、多糖、蛋白质、尿囊素、皂苷等多种生物活性物质[4]。黄酮类化合物是植物代谢过程中产生的低分子量的二次代谢产物，是以2-苯基氯酮为基础的化合物[5]。黄酮类化合物种类很多，多以游离态或与糖结合成苷的形式存在，具有显著的药理和生理活性[6-7]，可以去除体内的氧自由基，是一种天然的强抗氧化剂。还有改善血液循环[8]、美容保健[9]等功效。近年来，以山药为原料生产加工的食品保健品，如山药核桃奶、山药饼、山药糕点等深受人们喜爱，具有较高的市场价值和实用价值。 超声波提取法[10]是采用超声波辅助溶剂进行提取，利用超声波具有的特性，通过增大介质分子的运动速度、增强介质的穿透力来破坏植物药材的细胞，从而提取出黄酮、皂苷、香豆素，木质素和生物碱等有效成分[11]。与传统有机溶剂萃取法[12]、碱溶酸沉法[13]、水浸提法[14]、酶水解法[15]等方法相比，具有萃取时间短、萃取效率高、经济环保且不影响提取物活性等优点。在试验提取和工业生产过程中具有非常广阔的应用前景。 1 材料与方法 1.1 材料及试剂 材料：山药，购于当地市场。选择新鲜、无霉点、无腐烂的山药，清洗晾干，去皮后切成小块，于85℃下烘干后粉碎，过60目筛，制得山药粉。 试剂：芦丁标准品、亚硝酸钠、无水乙醇、无水甲醇、硝酸铝、氢氧化钠、抗坏血酸，均为AR；ABTS，DPPH，美国SIGMA-ALORICH提供。 1.2 试验方法 1.2.1 绘制芦丁标准曲线 精确称取10 mg标准芦丁样品，用75%乙醇配制0.2 mg/mL常规标准溶液。取芦丁标准溶液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，10.0 mL于6个25.0 mL容量瓶中，再加入5%亚硝酸钠1.0 mL，摇至混合均匀，于室温下静置6 min；加入10%硝酸铝1×10-3L，摇至混合均匀，室温下静置6 min；向系统中加入4%的氢氧化钠溶液10.0×10-3L，用75%乙醇定容至容量瓶刻度线，摇至混合均匀后静置15 min。同时，以75%乙醇为空白对照组，用紫外分光光度计测定波长510 nm处的吸收度。以芦丁的质量浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制芦丁标准曲线，确定回归方程Y=11.682X+0.012 4，R2=0.989 5。 芦丁标准曲线见图1。 图1 芦丁标准曲线 式中：Y总——山药总黄酮的提取率，%； V总——提取液的总体积，mL； m——称取的山药粉的质量，mg； C——样品中山药黄酮的质量浓度，mg/mL。 1.2.3 单因素试验 采用单因素试验研究乙醇体积分数、料液比、超声时间和超声温度对总黄酮提取率的影响。①乙醇体积分数：称取1 g山粉末5份，分别加入45%，55%，65%，75%，85%乙醇（体积分数，下同）20 mL，50℃提取2 h，以转速8 000 r/min离心10 min，取上清液。②料液比：称取1 g山药粉5份，加入85%乙醇，按1∶10，1∶15，1∶20，1∶25，1∶30（g∶ 1.2.2 山药中总黄酮的测定 称取1.0 g山药粉，在超声波处理机中加入一定体积分数的乙醇和一定的料液比，按照一定的提取时间和温度进行超声波辅助提取。于转速8 000 r/min离心10 min，收集上清液，测定体积。以乙醇为空白对照，于波长510 nm处测定吸收度，按照标准曲线计算芦丁当量，计算上清液中总黄酮含量。黄酮类化合物（Y）的提取公式如下：mL，下同）加入物料中，于60℃下提取2 h。③超声时间：称取1 g山药粉5份，加入20 mL 65%乙醇，60℃下分别提取0.5，1.0，1.5，2.5，2.5 h。④超声温度：称取1 g山药粉5份，加入20 mL 85%乙醇，在40，50，60，70，80℃提取2 h。以乙醇为空白对照，在波长510 nm处测定芦丁的体积和吸光度。根据芦丁标准曲线计算芦丁当量，并计算上清液中黄酮类化合物的含量。 1.2.4 正交试验设计 在单因素试验优化结果的基础上，建立了四因素三水平的正交试验。采用L（934）正交试验优化了山药总黄酮的提取工艺。 正交试验因素与水平设计见表1。 表1 正交试验因素与水平设计 1.2.5 山药总黄酮的抗氧化活性 （1） 山药黄酮提取液的制备。山药干粉150 g，乙醇体积分