尼古丁微生物降解代谢机制和应用的研究进展.docxVIP

? ? 尼古丁微生物降解代谢机制和应用的研究进展 ? ? 李晓华，梅 枫，孔 雯，李 阳，马婷婷，皮 婷 (中南民族大学 生命科学学院 生物技术国家民委重点实验室，武汉 430074) 尼古丁微生物降解代谢机制和应用的研究进展 李晓华，梅 枫，孔 雯，李 阳，马婷婷，皮 婷 (中南民族大学 生命科学学院 生物技术国家民委重点实验室，武汉 430074) 为进一步了解利用生物降解消除环境中尼古丁污染的最有前景的方法，综述了国内外尼古丁降解微生物、尼古丁降解代谢途径(真菌的去甲基化途径、革兰氏阳性菌的吡啶和吡咯途径、革兰氏阴性菌吡啶与吡咯途径的混合途径)、降解基因簇及其在环保和药学领域的应用，旨在为微生物降解尼古丁的深入研究和应用提供参考. 尼古丁；微生物降解；代谢途径；应用 尼古丁[1-甲基-2-(3-吡啶基)-吡咯烷]是一种存在于茄科植物(茄属)中的生物碱，是烟草的重要成分，占烟叶干重的2%～8%[1]. 自然环境和人类生活环境中的尼古丁污染大部分来源于烟草工业废弃物，烟草工业每年生产约300274 t尼古丁废弃物[2]. 尼古丁易溶于水，导致地下水的污染，扰乱生态平衡. 因此，将尼古丁污染从土地和水中移除成为了亟待解决的问题. 尼古丁能引起严重的血管疾病、癌症、基因突变、畸形等，作为神经毒素能影响细胞凋亡、细胞的畸形生长、提高基因表达率、分泌激素和调节酶的活性等. 它还能快速地通过生物膜和血脑屏障，加快心率和升高动脉压，引起静脉功能障碍. 尼古丁还通过作用于位于中央神经系统的神经型尼古丁受体，释放如多巴胺和血清素的神经传导物质，激活大脑皮层中心多巴胺系统，加强生理依赖效应[3]. 目前，降解尼古丁的主要方法有物理法、化学法和生物法. 物理法包括吸附法和萃取法；化学法则是利用强氧化剂改变尼古丁官能团或化学键的性质降解尼古丁. 但是物理或化学方法降解尼古丁耗时长、花费高、效率低、易造成二次污染，故利用生物降解是消除环境中尼古丁污染的最有前景的方法. 近年来，越来越多的尼古丁降解菌被分离，在尼古丁的微生物降解途径和应用方面取得进展. 本文对国内外尼古丁降解微生物、尼古丁降解代谢途径及其降解基因簇研究进展进行了综述. 1 降解尼古丁的微生物 降解尼古丁的微生物易适应被污染的环境，烟草环境中的细菌和真菌都有降解尼古丁的能力[4]，通常将尼古丁作为生长所需的唯一碳源、氮源和能源. 自20世纪50年代起，尼古丁降解菌Arthrobacternicotinovorans已被广泛研究，近年来，越来越多的节杆菌被报道能够降解尼古丁(见表1). 从烟草种植地分离出的尼古丁降解菌ArthrobacternicotianaeK9，能在尼古丁浓度达到1.0 g/L的培养基中生长，尼古丁降解效率在24 h内达到85%[5]. Lei 等[6]用节杆菌K7和K3的细菌悬液处理收获的K326烟叶，烟叶的尼古丁含量减少. Ruan等[7]发现的Arthrobactersp. HF-2降解尼古丁的最适温度为30℃，最适pH为7.0. 在1953年，Wada和Yamasaki从土壤中分离出Pseudomonassp. 41，该菌株能在pH 6.4和30℃下降解尼古丁[8]. 假单胞菌属中的尼古丁降解菌能在高浓度尼古丁的培养基中生长，尼古丁降解效率随着细菌细胞的生长而增加，降解最适pH值为6.4～7.4，最适温度为30℃，而PseudomonasstutzeriZCJ为37℃[9].从土壤和烟叶中分离得到的降解尼古丁的细菌除了节杆菌和假单胞菌，还包括Rhodococcussp. Y22，Ensifersp. N7，AgrobacteriumtumefaciensS33，Acinetobactersp. TW和Ochrobactrumsp. SJY1等细菌. 大多数细菌能够在28～30℃、pH 7.0的条件下降解尼古丁，还有少数真菌被分离鉴定能够降解尼古丁. 表1 尼古丁降解微生物及其降解最适条件Tab.1 Nicotine-degrading microorganisms and their optimal condition for degradation 注：-表示文献中未报道 2 微生物中尼古丁降解基因 编码尼古丁降解的基因不仅位于细菌染色体上，也存在于质粒上P.convex菌株尼古丁降解基因，除在染色体之外，由NIC质粒介导.A.nicotinovorans中大小为160 kb的质粒pAO1(见图1，Reference[10、14、24、29])包含负责尼古丁降解的基因簇. Brandsch等[4]对pAO1进行亚克隆，利用表达载体pBR322和pUR222将6hdno基因在大肠杆菌进行表达. Grether等[36]测序分析发现，ndh基因与6hd