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? ? 西洋参不同部位人参皂苷类成分研究 ? ? 逄世峰，李亚丽，许世泉，孙成贺，赵景辉，王英平 (中国农业科学院特产研究所，长春130112) 西洋参不同部位人参皂苷类成分研究 逄世峰，李亚丽，许世泉，孙成贺，赵景辉，王英平* (中国农业科学院特产研究所，长春130112) 研究西洋参不同部位人参皂苷类成分的变化。采用超高效液相色谱法，测定西洋参不同部位人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd的含量。西洋参地上和地下部位皂苷组成不同，西洋参叶中人参皂苷Rb3含量较高，西洋参根中人参皂苷Rc主要集中于参皮。明确了西洋参不同部位皂苷组成差异，为西洋参资源的合理利用提供理论依据。 西洋参；不同部位；人参皂苷；超高效液相色谱 西洋参(PanaxquinquefoliusL. )系五加科人参属植物，原产于北美的加拿大和美国，是重要的药用植物，已被广泛使用。人参皂苷是西洋参中重要的活性成分[1-2]，具有抗肿瘤、抗疲劳、降血糖、提高免疫力，以及改善学习记忆能力等多种生物活性和药理活性[3-4]。西洋参根通常是药用的主要部位，人参皂苷也分布在植物的其他部位，各部位的人参皂苷含量和组成不尽相同[5-7]，然而对于参心(木质部)和参皮(周皮和韧皮部)中人参皂苷组成研究较少。 目前，很多分析方法用于人参属植物中人参皂苷的检测，高效液相色谱使用最为普遍，然而其分析时间较长，一般均超过60min[8-9]。超高效液相色谱(UPLC)是中药研究领域发展的一个极大促进，卓越的分离度和灵敏度更适合于中药复杂样品的分析，同时减少了溶剂消耗，并极大的缩短了分析时间[10]。MCI GEL CHP 20P树脂用于反相色谱分离，与C18填料相似，适于人参皂苷的富集[11]。 本研究建立了一种快速稳定的UPLC-UV检测西洋参中人参皂苷方法，对西洋参茎、叶、主根、须根、芦头、根皮、根心中人参皂苷含量和组成进行了研究。 1 仪器和材料 超高效液相色谱仪ACQUITY UPLC(waters公司)；乙腈为色谱纯(Fisher)，水为超纯水(Millipore)，其他试剂均为分析纯；人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd(中国药品生物制品检定所)。 西洋参采自吉林省和龙市，经中国农业科学院特产研究所许世泉副研究员鉴定。全部样品均为4年生西洋参，采集于2013年9月。西洋参的主根、须根、芦头、茎、叶被分离，切取主根中部1.5cm小段，分成根皮和根心2部分。全部样品于50°C烘干至恒重，粉碎，过60目筛。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1×50mm，1.7μm)，流动相乙腈-水(梯度洗脱：0～3min，17%～19%乙腈；3～4min，19%～21%乙腈；4～5min，21%～26%乙腈；5～9min，26%～27%；9～12min，27%～32%乙腈；12～15min，32%～43%乙腈)，流速0.5 mL/min，检测波长为203 nm，柱温35℃，进样量2μL。 2.2 溶液制备 2.2.1 对照品溶液。精密称取8种人参皂苷标准品，配置成含人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd含量分别为1.002mg/mL、2.136mg/mL、0.609 mg/mL、2.586mg/mL、0.651mg/mL、0.663mg/mL、1.272mg/mL、1.890mg/mL的混合对照品溶液。 2.2.2 供试品溶液[10-12]。取0.1g的样品粉末，精密称定，置于离心管中，加入甲醇1mL，室温超声(功率500W，频率40kHz)提取30min，离心，再重复提取2次，合并提取液，60°C挥干溶剂，残渣加20%甲醇水溶解，西洋参叶提取液定容至10mL，其他提取液定容至1mL，备用。 将0.5mL提取液转移至预先用5mL甲醇和8mL水冲洗过的MCI小柱(直径：1.5cm，填料：1g)，用5mL水冲洗，弃去水液，再用5mL甲醇洗脱皂苷，50°C挥干洗脱液，1mL甲醇溶解，过0.22μm PTFE滤膜，进样分析。 2.3 方法学考察 2.3.1 线性关系考察与定量限(LOQ)、检测限(LOD)。将混合对照品溶液分别用甲醇稀释1倍、1.5倍、2倍、4倍、150倍，制成一系列浓度的混合标准品溶液，依次注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。各人参皂苷检出限(LOD)和定量限(LOQ)由3倍和10倍信噪比计算而来，结果见表1。 表1 人参皂苷的线性回归方程与LOQ，LOD 2.3.2 精密度试验。取同一浓度的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6 次，进样量2μL，测定峰面积，计算得人参皂苷Rg