西瓜籽油脂肪酸成分分析及抗氧化活性研究.docxVIP

? ? 西瓜籽油脂肪酸成分分析及抗氧化活性研究 ? ? 盘鹏慧 罗伟强 莫 丹 庞 晓 (广西民族大学，广西 南宁 530006) 西瓜籽中含有维生素、微量元素、蛋白质、脂肪等多种营养成分[1-2]，其中脂肪中不饱和脂肪酸含量较丰富[3-4]。研究[5]表明，西瓜籽油有辅助降血脂功能。 目前有关各种植物油脂的提取、成分及其含量、抗氧化活性的研究时有报道[6-12]，而有关西瓜籽油的研究多集中在提取工艺方面[13-14]。研究拟采用索氏法对西瓜籽进行提油，用GC-MS对西瓜籽油的脂肪酸组成、含量进行分析，并研究西瓜籽油的体外抗氧化能力，以期为西瓜籽油在天然抗氧化剂、医疗、保健等方面的开发利用提供参考。 1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 原料与试剂 西瓜籽：市售； 石油醚(沸程60～90 ℃)、硫酸、甲醇、硫酸亚铁、无水乙醇、三氯化铁、抗坏血酸(维生素C)、硫酸亚铁、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼：分析纯，国药集团化学试剂有限公司。 1.1.2 主要仪器和设备 电子天平：AB204-S型，上海帅宁仪器有限公司； 电热恒温鼓风干燥箱：GZX-GF101-3BS型，上海齐欣科学仪器有限公司； 高速多功能粉碎机：CS700型，永康市天祺盛世工贸有限公司； 旋转蒸发仪：RE-52AA型，上海亚荣生化仪器厂； 循环水式多用真空泵：SHB-ⅢA型，郑州长城科工贸有限公司； 紫外可见分光光度计：752N型，北京合悦达科技有限公司； 气相色谱—质谱联用仪：Clarus500型，美国铂金埃尔默公司。 1.2 试验方法 1.2.1 西瓜籽油的提取 根据文献[15]，将西瓜籽置于洁净的搪瓷盘上，70 ℃干燥6 h。取出，室温冷却后取适量西瓜籽于高速粉碎机中搅拌1 min，得西瓜籽细粉。准确称取40.511 3 g西瓜籽细粉，用滤纸包好放在盛有适量石油醚的烧杯中浸泡6 h。将其取出置于500 mL的索氏提取器中，用石油醚为溶剂回流5 h左右，至溶剂用滤纸检测无油迹后，停止回流。提取液经滤纸过滤后，先用旋转蒸发仪除去大部分溶剂，再通过沸水浴除去残余溶剂，即得浅黄色的西瓜籽油15.469 g，提取率为38.18%。 1.2.2 西瓜籽油中脂肪酸的GC-MS分析 (1)酯化处理：根据文献[16]，略有改动。称取0.1 g西瓜籽油，加入体积分数5%的硫酸—甲醇溶液2 mL，60 ℃ 水浴超声30 min后，再加入正己烷2 mL，充分振荡后静置。取上层清液加入无水硫酸钠，取上层清液进行GC-MS分析。 (2)气相色谱条件：色谱柱为PE-5弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，以高纯氦气为载气，流速1.00 mL/min，程序升温：起始温度80 ℃，以14 ℃/min升温至195 ℃，195 ℃保持9 min，然后以6.0 ℃/min升温至280 ℃，280 ℃保持3 min。进样口温度260 ℃，进样量1.0 μL，分流比40∶1。 (3)质谱条件：EI源，电离电压70 eV，传输线温度280 ℃，离子源温度230 ℃，扫描范围33～500 amu。 1.2.3 还原Fe3+能力测定 根据文献[17]，将西瓜籽油配置成系列浓度梯度溶液，分别取1 mL各浓度的西瓜籽油溶液，依次加入2.5 mL磷酸盐缓冲溶液(0.2 mol/L)、2.5 mL的铁氰化钾(10 mg/mL)，50 ℃水浴锅中恒温加热20 min。再加入2.5 mL三氯乙酸(0.1 g/mL)，摇匀后，3 000 r/min离心10 min，取上清液2.5 mL，加入2.5 mL去离子水及0.5 mL的三氯化铁(1 mg/mL)。室温下反应5 min，在700 nm处测定该样品吸光度，用去离子水做空白对照，VC作为阳性对照。做3次平行试验，取平均值。 1.2.4 清除DPPH自由基能力测定 分别量取3 mL各浓度的西瓜籽油溶液与2 mL DPPH溶液(0.2 mmol/L)混合，摇匀后避光静置30 min，于517 nm处测定其吸光度[18-19]。用去离子水做空白对照，VC作为阳性对照。做3次平行试验，取平均值，按式(1)计算DPPH自由基清除率。 E=[1-(A1-A2)/A3]×100%， (1) 式中： E——DPPH自由基清除率，%； A1——样品溶液和DPPH溶液的吸光值； A2——样品溶液和无水乙醇的吸光值； A3——去离子水和DPPH溶液的吸光值。 1.2.5 清除超氧阴离子自由基能力测定 根据文献[20]，修改如下：在具塞试管中分别加入1 mL各浓度的西瓜籽油溶液、4.5 mL Tris-HCl缓冲液(0.05 mol/L)、0.1 mL邻苯三酚溶液(3 mmol/L)，混匀，于25 ℃下反应5 min，然后加入1 mL HCl溶液(8 mm