西藏林芝地区不同品种葡萄果实表皮微生物群落结构组成分析.docxVIP

? ? 西藏林芝地区不同品种葡萄果实表皮微生物群落结构组成分析 ? ? 何 萍，王健强，高 潭，陈诚欣，徐雨婷，简 阅，刘盼盼，张二豪 （西藏农牧学院 食品科学学院，西藏 林芝 860000） 西藏林芝市位于西藏东南部，雅鲁藏布江中下游，平均海拔3 100 m，其独特的高原气候类型赋予了该地区昼夜温差大、光照充足和紫外线强的特点，为果树种植提供了得天独厚的生长环境，因此，素有“西藏江南”和“水果之乡”的美称。 葡萄（Vitis viniferaL.）为葡萄科葡萄属多年生木质藤本植物，是栽培历史悠久、栽培面积最大的水果之一[1]。目前，全球葡萄品种数量巨大，超过23 000种[2]，由于其富含维生素、蛋白质、有机酸及矿物质等营养成分深受消费者的青睐[3-5]。在我国，葡萄主要用于鲜食，其次是酿酒和制干[5]，但从世界范围来看，葡萄主要用于酿酒，其次是鲜食和制干[6]。随着人们生活水平的提高和健康意识的增强，葡萄酒作为一种功能保健品深受广大消费者的青睐。葡萄酒具有抗癌、降血糖、抗氧化及增强免疫力等功效[7]，但葡萄酒品质受葡萄品种、酿造工艺、产地和表皮微生物等因素影响[8]。葡萄酒酿造的本质是一系列微生物发酵和代谢的过程，其中酵母菌、乳酸菌、醋酸菌和霉菌在发酵过程中扮演着重要角色[9]，而这些微生物主要来源于葡萄表皮和发酵设备[10-11]。研究表明，在葡萄酒酿造过程中，葡萄果实表皮微生物葡糖杆菌属（Gluconobacter）等能促进酯类物质的合成，进而改善葡萄酒的品质，乳酸菌属（Lactobacillus）等则会产生异味，影响葡萄酒的感官[12]；本土酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）能够显著提升酒的风味物质[13]；增芳德葡萄表皮上的非酿酒酵母泽普林假丝酵母（Candida zemplinina）能增强葡萄酒的口感[14]。葡萄表皮微生物受产地、品种和环境等因素影响，张世伟等[15]研究表明，不同品种葡萄表皮微生物群落结构组成存在明显差异；赵昱等[16]研究表明，不同产区酿酒葡萄表皮微生物存在一定的差异。综上所述，葡萄表皮微生物在葡萄酒酿造过程中扮演着重要角色，且受产地、品种、气候和环境等因素的影响。西藏林芝市具有独特的地理位置和气候类型，蕴藏着丰富的微生物资源，因此，探明林芝地区不同品种葡萄果实表皮微生物群落结构组成，对筛选利用功能微生物具有重要意义。 本研究利用高通量测序技术对西藏林芝地区的‘夏黑’、‘火焰无核’、‘茉莉香’和‘玫瑰香’葡萄果实表皮微生物群落结构组成进行分析，揭示不同品种葡萄果实表皮微生物多样性，为葡萄种植管理和筛选利用本土优质的微生物资源提供理论参考。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 1.1.1 样品的采集与处理 2021年8月从西藏林芝市嘎玛农场（纬度29°2444.74N，经度94°2626.86E）采集‘夏黑’（Summer Black）、‘火焰无核’（Flame Seedless）、‘茉莉香’（Jasmine）和‘玫瑰香’（Muscat Hamburg）共4个品种的葡萄果实样品，编号分别为XH、BL、ML、MG。随机选取10株生长一致的葡萄树（10年生），用无菌剪刀分别采集每株葡萄树上、中、下部位的成熟果实，并混合均匀，置于无菌袋中，每组3个重复，-20 ℃保存备用。 称50 g葡萄样品，加入200 mL 0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）（pH7.0），200 r/min涡旋30 min，超声处理20 min，经0.22 μm无菌滤膜过滤后，取出滤膜并剪碎置于无菌离心管中[16]，-80 ℃保存备用。 1.1.2 主要试剂 DNeasy Plant Mini Kit提取试剂盒：美国Qiagen公司；Taq脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）聚合酶（5.0 U/μL）、脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleoside triphosphate，dNTPs）（5 mmol/L）、普通DNA产物纯化试剂盒：天根生化科技（北京）有限公司；琼脂糖、Qubit2.0 DNA检测试剂盒：美国Invitrogen公司；其他试剂均为国产分析纯。 1.2 仪器与设备 TD-GelX 1520凝胶成像系统、T100聚合酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR）仪：美国Bio-rad公司；WS600电泳仪：万生博朗电子有限公司；NanoDrop2000微量分光光度计：美国Thermo公司；5424、5418R离心机：德国Eppendorf公司；IMS-20制冰机：上海精密仪器仪表有限公司；UPT-I-5T优普系列超纯水器：四川优普超纯科技有限公司。 1