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马铃薯脱毒原种快速繁育技术 在无菌条件下，人工培养基用于培育甘薯脱毒苗，并将其移植到培基中生产原始菌株。这是甘薯脱毒生产的一个重要过程。前人对马铃薯无病毒种薯生产已作了一定的研究和论述,但比较系统全面地研究脱毒原原种高产、高效、低耗、快繁技术的报道尚少。为了降低生产成本,为规模化生产脱毒种薯提供廉价的脱毒原原种,我们对马铃薯脱毒原原种高产快繁技术进行了系统的研究,并在研究工作的基础上形成了规模化生产,建成了年产40万株脱毒试管苗、100万粒脱毒原原种的快繁生产线,成为全省马铃薯脱毒苗和脱毒原原种的繁育基地,总结了一套脱毒原原种高产快繁技术在生产上应用。 1 材料和方法 1.1 毒试苗的引进 试验在本所苗木组培中心组培室和防虫隔离大棚进行。每项试验的各个步骤严格消毒,网棚内每周喷一次药防治蚜虫和晚疫病。供试品种为中薯3号。由本所组培中心从中国农科院蔬菜花卉研究所引进经检测鉴定的脱毒试管苗。应用组培技术切段快繁的脱毒苗为试验材料。 1.2 测试方法 1.2.1 替分析纯蔗糖 简化培养基采用常规全量MS培养基中去掉微量元素和有机物质,并用市售食用白砂糖代替分析纯蔗糖(用量均为30 g·L-1),用深井水(40 m深井水)代替蒸馏水配制,琼脂用量均为8 g·L-1。将脱毒苗切成每节带一个叶片的茎段,在无菌条件下接种于简化培养基和常规MS培养基中,每瓶接种6个茎段,每处理50瓶,3次重复。 1.2.2 无毒苗的脱毒苗的分离培养 脱毒苗移栽前的最后一次扩繁,采用液体培养基浅层静置培养代替固体培养,即把脱毒苗切段转接到不加琼脂的MS液体培养基上,每瓶液体培养基用量约为固体培养基的1/3至1/2,接种6个茎段,以常规MS固体培养基(加琼脂8 g·L-1)为对照,每处理50瓶,3次重复。 1.2.3 罐头瓶培育管苗 常规培养容器采用三角瓶加棉花塞及牛皮纸封口培育试管苗,新培养容器采用200 ml普通广口玻璃罐头瓶(无色、透明)加无色半透明塑料盖封口培育试管苗。每处理接种50瓶,每瓶6个茎段,3次重复。 以上3个试验的培养条件相同,均为(24±1)℃下每天光照16 h,光强2 000 lx,培养20 d后测定苗高、茎粗、生根情况、污染率及成苗率,进行成本核算并加以比较。 1.2.4 基础苗扦插方法 将长有5～6节的脱毒试管苗连瓶放在窗口处或走廊散射光强的地方,使幼苗经过3～4 d的锻炼后,栽植在防虫网棚的育苗床上作基础苗,以蛭石和草碳土(1∶1)为基质,定期浇水和施肥,3周后苗高6～10 cm时进行切繁方法试验。①常规单节剪插法是把基础苗剪成一节带一叶段扦插,待切段长成苗后再按同法剪切扦插。②剪顶扦插法是先剪去基础苗顶端带2～3个叶片的茎段扦插;基础苗余下的部分每节腋芽会很快长出,6～7 d后可进行第2次切繁,同第1次一样剪取各侧枝顶端带2～3个叶片的茎段扦插;作为基础苗的母株每隔6～7 d就可再剪顶扦插1次,而剪顶扦插的茎段15～20 d也可作基础苗进行剪顶扦插。每处理基础苗50株,3次重复。切繁45 d后统计切繁苗数,计算繁殖系数并与常规单节剪插法比较。 1.2.5 原原种的收获和管理 常规方法是一株脱毒苗一次性栽植60 d后收获一次原原种。一次栽苗两次收种的具体作法是:将脱毒苗按5 cm×10 cm的株行距定植在铺有蛭石和草炭土(1∶1)的种植槽中,常规管理60 d后第1次收获原原种,之后立即用周围的培养基质把原植株覆盖培土,并喷透水,植株恢复正常生长后增施1次三元复合肥。以后按常规喷水施肥、喷药管理50 d后第2次收获原原种。两种方法各取样2 400株。每次收获后统计原原种个数和重量并加以比较。 1.2.6 多效唑生长马铃薯 中薯3号扦插苗按5 cm×10 cm密度扦插,插后40 d生长达20 cm以上时喷施90 mg·L-1多效唑溶液(15%多效唑可湿性粉剂,江苏盐城市利民化工厂产),以喷清水为对照,喷后10 d测定株高、茎粗,喷后15 d观察生长情况,喷后30 d收获种薯,每处理6.6 m2,3次重复。按大薯(11 g以上)、中薯(6～10 g)、小薯(1～5 g)分类统计结薯数量和重量及所占比例,并与对照进行比较。 2 结果与分析 2.1 促进生长增殖 从表1可见,简化培养基与常规配制的全量MS培养基相比,繁殖的试管苗均表现叶大色绿。在温度(24±1)℃、2 000 lx光照16 h·d-1条件下每20 d都可发育成6～7 cm高的小植株,可再进行切段繁殖,污染率、月增殖率与对照成株率无显著差异,植株生长正常,说明深井水配制培养基对试管苗的生长增殖不会造成抑制或危害。因此,简化培养基既不影响培养效果,又可节约药品费用和省去烧制蒸馏水的耗电及人工费用,培养基成本可降低55.3%。 2.2 液体培养基的生长快、成本低、节约高效 从固体