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参附青注射液冻干粉针的制备及稳定性考察 人参绿茶由红参、绿皮等中药组成。阳功益灵阳，益气健康。适合由阳虚、面色苍白、四肢发冷、出汗、全身痉挛和各种原因引起的休克。在临床表现中，对邪毒内容性障碍有显著影响。注射液的剂型临床用于厥脱之类的急重症优势明显,但由于注射液本身存在一些不稳定因素,如灭菌后pH值的改变及贮藏过程中澄明度的改变,因此,为保证参附青注射液的疗效、安全性及质量稳定性,拟将其制备成冻干粉针剂,本文筛选了参附青冻干粉针成型工艺中的工艺条件,并对冻干粉针与注射液的稳定性进行了比较。 1 仪器和试剂 Labconco真空冷冻干燥机;岛津UV-240型分光光度仪;参附青注射液中间体由上海曙光医院制剂室提供(批号030625);人参皂苷Re对照品由中国药品生物制品检定所提供。 2 水分升华除 冷冻干燥是将药液在低温下冻结成固体,再在一定真空与低温下将水分升华除去。影响冻干成品质量的因素很多,包括冻干前药液浓度、充填剂种类、充填剂浓度以及升华干燥过程工艺条件的控制。 2.1 冻干工艺的考察 中药复方注射剂成分复杂,药液浓度对成品性状有很大影响,因此将冻干前药液配成含固形物量分别为4%、5%、6%、8%、12%的浓度,加入一定量的甘露醇,进行冻干,观察成品性状,结果见表1。 由表中可见,药液固形物量在8%以下成型性较好,浓度为6%时,冻干液的体积小,厚度适宜,有利于冷冻干燥过程的进行,故选择药液固形物含量为6%的浓度进行冻干。 2.2 不同充填剂的冻干试验结果 主要选取了价廉易得、常用的充填剂甘露醇、葡萄糖、氯化钠、乳糖,同时选择了水溶性好的HP-β-CD进行试验。根据2.1项筛选出的药液固形物含量以6%为好,因此固定药液浓度为6%,分别加入以下比例的不同充填剂,进行冻干,观察成品性状,结果见表2、表3。 充填剂的共熔点影响冻干效果,甘露醇的共熔点高,水溶性好,利于本品的冻干和成型,而其他的充填剂均不适于本品,故选择甘露醇为充填剂。 2.3 冻干成分配比及添加量的确定 充填剂的用量也影响着产品的成型,且为使产品易于冻干及复水性好,冻干液的浓度应在4%～25%之间,因此固定药液为6%的浓度,分别加入不同比例的甘露醇,考察冻干成型效果,结果见表4。 可见,甘露醇浓度在8%以上,产品成型效果好,从节约成本考虑,确定甘露醇浓度为10%。 2.4 共熔点温度的测定 冷冻干燥时,在冻结与升华过程中,制品的温度超过了最低共熔点,则部分溶质或全部溶质将处于液相中,冰晶体的升华被液体浓缩蒸发所取代,干燥后的制品将发生萎缩,溶解速度亦降低,因此最低共熔点是获得最佳冻干效果的临界温度。共熔点温度的测定可采用电阻测定法,根据相变时产生电阻或电导显著变化的原理,通过测定电阻变化而定。 按以上筛选出的条件配制药液(6%的药物加10%的甘露醇),放置于-50 °C低温下,同时测定电阻,记录电阻及药液温度变化,当电阻变化率最大时所对应的药液温度即为其最低共熔点。经测定,参附青粉针的最低共熔点约为-21 °C。因此本品在冷冻干燥时,预冻温度及升华干燥时搁板的温度均应保持在-21 °C以下。 2.5 首次测定了绿色冷冻粉末和注射剂的稳定性 采用稳定性试验,对参附青冻干粉针与注射液的质量进行了考察。 2.5.1 线性关系法的建立 标准曲线的制备 精称人参皂苷Re对照品加甲醇配成浓度为1.05 mg·mL-1的对照品液,精吸30,60,90,120,150 μL置具塞试管中,补充蒸馏水至150 μL。将试管置冰水浴中,精密加入8%香草醛乙醇液0.5 mL和77%硫酸溶液5.0 mL,摇匀后置60 °C水浴加热10 min,取出,迅速置冰水浴中冷却15 min。在另一试管加蒸馏水150 μL,按以上步骤显色作为空白对照液,显色溶液在波长370～700 nm扫描,测得最大吸收波长为540 nm(图1),求得线性回归方程为C=211.26A+0.2749,γ=0.9992。 供试品溶液的制备及测定 精吸样品液10 mL于分液漏斗中,用乙醚20、20、20、10、10 mL萃取,弃去乙醚层,水层再用水饱和正丁醇20、20、20、10、10 mL萃取,合并正丁醇层,减压回收至干,残渣加甲醇溶解定容于5 mL量瓶,精吸70 μL于具塞试管中,加入80 μL蒸馏水,摇匀,将试管置冰水浴中,精密加入8%香草醛乙醇液0.5 mL,77%硫酸5.0 mL摇匀,置60 °C水浴加热10 min,取出,迅速置冰水浴中冷却15 min,同时以150 μL蒸馏水做空白对照。显色溶液在波长370～700 nm扫描,测得最大吸收波长为540 nm(图2)。同法制得的缺红参阴性对照品在540 nm处无吸收,说明方中其它成分对皂苷的含量测定无干扰。 冻干粉针每瓶精密加入10 mL水溶解后取样同法制备供