蛋白质的稳定性.pptxVIP

第四章 蛋白质稳定性和稳定化 ? 第一节 蛋白质稳定性 ?一、蛋白质稳定性指是蛋白质抵抗多种原因影响，保持其生物活力能力。 二、蛋白质稳定性分子原因 1、金属离子、底物、辅因子和其他低分子量配体结合作用。 金属离子由于结合到多肽链不稳定部分（尤其是弯曲处），因而能够显著增加蛋白质稳定性。当酶与底物、辅因子和其他低分子量配体互相作用时，也会看到蛋白质稳定性增加。 ;2、蛋白质-蛋白质和蛋白质-脂作用 在体内，蛋白质常与脂类或多糖互相作用，形成复合物，从而显著增加蛋白质稳定性。 当蛋白质形成复合物时，脂分子或蛋白质分子稳定到疏水簇上，因而避免疏水簇与溶剂接触，屏蔽了蛋白质表面疏水区域，从而显著增加蛋白质稳定性 ;3、盐桥和氢键 蛋白质中盐桥数目较少，但对蛋白质稳定性奉献很显著。嗜热脱氢酶亚基间区域有盐桥协作系统，这是嗜温脱氢酶没有。因此嗜热酶催化活力变性温度和最适温度都比嗜温酶高出约20℃。 用定点突变法定性定量地测定了引入氢键对蛋白质稳定性奉献，发觉加入氢键与蛋白质稳定性无关。;4． 二硫键 大分子分子内交联可增强其坚实性，并提升其在溶液中稳定性。 稳定化指是熵性质：由于交联即蛋白质中形成二硫键，伸展蛋白质熵急剧减少 ;物质熵是它所处状态分子混乱度  ;5、对氧化修饰敏感氨基酸含量较低 构造上主要氨基酸残基（如活性部位氨基酸）氧化作用是蛋白质失活最常见机理之一。半胱氨酸巯基和色氨酸吲哚环，对氧化尤其敏感，因此，这些不稳定氨基酸数目，在高度稳定嗜热蛋白质中比在对应嗜温蛋白质中显著偏低。 ;6、氨基酸残基坚实装配 蛋白质构造中存在有空隙。按照Chothia说法，蛋白球体积大约25%仍未充满，即不是被氨基酸占据。但溶质分子能够包埋在这些孔隙中。这些孔隙一般为水分子所充满。分子量为2―3万蛋白质中约有个5―15水分子 。由布朗运动调整极性水分子与球体疏水核接触会造成蛋白质不稳定。伴随水分子从孔隙中除去，蛋白质构造变得更坚实，蛋白质稳定性也增加。因此，蛋白质坚实化可作为一种人为稳定蛋白质办法。 ;7、疏水互相作用 带有非极性侧链氨基酸大约占蛋白质分子总体积二分之一。它们与水接触从热力学上来说是不利，由于非极性部分加入水中，会使水构造更有序地排列。 水分子这种构造重排，显然能引发系统熵减少和蛋白质折叠状态变化：蛋白质非极性部分总是倾向于使其不与水接触，并尽也许地隐藏在蛋白球体内部。从而蛋白质稳定性增加。 ;第二节 蛋白质不可逆失活原因和机理 ? ;一、 蛋白水解酶和自溶作用 蛋白水解酶可催化肽键水解。当蛋白质底物也是一种蛋白水解酶时，就会发生自我降解现象，叫作自溶。 ;1、必须发生单分子构象变化，造成蛋白质可逆变性。这个过程使包埋疏水性氨基酸残基暴露于水溶剂。 2、这种三级构造变化了蛋白质分子彼此缔合，以最大程度地减少疏水氨基酸残基不利裸露。 3、假如蛋白质分子具有半胱氨酸和胱氨酸残基，则会发生分子间二硫交换反应。 与许多其他蛋白质失活原因不一样，聚合并不一定是不可逆。使用变性剂破坏分子间非共价力（氢键或疏水互相作用）并且在无变性剂时，通过还原和再氧化再生天然二硫键，则有也许使蛋白质再活化。;三、极端pH ;肽键水解也容易在强酸条件下或中等pH和高温相结合条件下发生。 在极端条件下（6 mol/L HCI，24h, 110℃）蛋白质可完全水解成氨基酸。 在强酸、中性和碱性pH下容易发生天冬酰胺和谷氨酰胺脱氨作用，成果在蛋白质疏水性内部引进入负电荷，造成酶失活。 ;四、氧化作用 多种氧化剂能氧化带芳香族侧链氨基酸以及蛋氨酸、半胱氨酸和胱氨酸残基。分子氧，H2O2和氧自由基是常见蛋白质氧化剂。在过渡金属离子（如Cu2+存在下），于碱性pH，半胱氨酸可氧化成胱氨酸。氧化剂强度不一样，半胱氨酸也可转变成次磺、亚磺或磺（半胱氨）酸。 H2O2是非专一性氧化剂。在酸性条件下，它主要把蛋氨酸氧化成它亚砜。;五、表面活性剂和去污剂 表面活性剂是由疏水基团和亲水基团组成化合物。 去污剂有离子性和非离子性两大类，都具有长链疏水尾巴但“头”部基团不一样，有带电，有不带电 去污剂在很低浓度下能使蛋白质发生强烈互相作用，造成蛋白质不可逆变性。 去污剂关键物理性质是其溶解度。如图4-7所示，当去污剂单体加入水溶液时，一部分溶解，一部分在气-水界面形成单层。 ; 图4-7 去污剂分子单体、单层和胶团形成示意图 ?表面活性剂分子两亲性质使之在水溶液中能自发形成构造有序多分子聚集体,一般称为胶团 ;阴离子去污剂，如十二烷基硫酸钠（SDS），与蛋白质结合百分比是溶液中游离SDS浓度函数。当单体SDS浓度使某一生物结合位点饱和时，则以协同方式结合其他位点，造成蛋白质伸展。